[其他]起交叉反应的环周子孢子蛋白保护性抗原决定基的制造方法

说明书

本发明提供对疟疾有保护性免疫作用的多肽抗原的制造方法及，将其用于制备疫苗的方法。该抗原具有与环周子孢子蛋白氨基酸顺序片段相对应的氨基酸顺序，它们位于这些蛋白串联重复部分的外部。本发明的抗原可用来诱发抗体的形成，这种抗体不仅能识别同种疟原虫抗原，也可识别它种疟原虫抗原。

本申请参照下述各专利的发明：

（a）美国专利，No4，466，917，Nussenzweig，R.等人，发表于1984年8月21日。

（b）Ellis，J.等人已转让的未决美国专利申请，No574，553，题目是：“保护性抗原肽”，于1984年1月27日申请。和

（c）Ellis，J.等人已转让的未决美国专利申请，No633，147，于1984年7月23日申请，题目是：“恶性疟原虫环周子孢子蛋白的保护性抗原肽”。

大多情况下，疟疾是通过感染疟疾病原虫蚊子的叮咬，把子孢子（疟疾寄生虫高度免疫原的形式）注入宿主的血液中，从而引起发病的。子孢子的免疫原性，既使不是唯一地但也大多地存在于一个单独的抗原即环周子孢子（CS）蛋白中。（F.Zavala，A.H.Cochrane，E.H.Nardin，R.S.Nussengweig和V.Nussenzweig等人在《试验医学杂志》（J.Exp.ned），1983年，157卷1947页，已作了详述。G.N.Godaon等人在《自然》（Nature）1983年，305卷29页，报环周子孢子蛋白（CS蛋白），是蚊子唾液中子孢子表面膜多肽的成分之一。该子孢子系由哺乳动物属的疟疾寄生虫而来。子孢子的强免疫原性主要是与CS蛋白有关。此蛋白是子孢子阶段所特有，具有重复的抗原决定基的免疫显性区。诺（耳斯）氏疟原虫（猴）CS蛋白从N端到C端的重复序列是：谷氨酰胺-丙氨酸-谷氨酰胺-甘氨酸-天冬氨酸-甘氨酸-丙氨酸-天冬酰胺-丙氨酸-甘氨酸-谷氨酰胺-脯氨酸。而恶性疟原虫CS蛋白的重复四肽序列是：天冬酰胺-丙氨酸-天冬酰胺-脯氨酸。由多个相同或类似的重复的氨基酸序列所组成的合成肽显示有抗原性，并可用它进一步制造疟疾疫苗。然而，令人遗撼的是，从CS蛋白免疫显性区得到的肽，它们之间很少显示同质性，因而它们只具有种属特异性的抗原。

由于CS蛋白重复抗原决定基的免疫显性迄今，还不能肯定：不含重复显性序列的CS蛋白的其它部分，是否能诱导出影响寄生虫存活的抗体。很明显，免疫抗原性本身并不能使那些诸如抗子孢子保护性抗原的非重复序列的肽具有实用性，因为这些片段需要在CS分子暴露的表面上才可被抗体识别。

本发明的一个目的是鉴定某一种属疟原虫环周子孢子表面蛋白的一些区域，即含该蛋白非重复性抗原决定基的区域。

本发明的另一个目的是鉴定CS蛋白非重复性抗原决定基，从而生产一种抗疟疾疫苗。

本发明还有一个目的是鉴定和合成肽（相当于CS蛋白非重复性抗原决定基）。该肽能在哺乳动物中诱导形成抗体，此抗体又可反过来去识别CS蛋白，特别是识别在子孢子表面上的CS蛋白。

本发明进一步的目的是鉴定与合成抗体，此诱导形成的抗体可识别多种疟原虫的CS蛋白。

本发明另一目的是以鉴定该肽为前提，进而制造一种合成的疟疾疫苗。

本发明还有一个目的是进一步生产一种用于制作哺乳动物用的疟疾疫苗的免疫因子。

本发明旨在生产某一种属疟原虫环周子孢子表面蛋白的某一抗原决定基肽，该肽不是该蛋白重复的免疫显性抗原决定基序列的肽，但该肽能在宿主中诱导形成识别环周子孢子表面蛋白的抗体。

本发明的肽是通过它诱导形成的抗体与CS蛋白相结合而被识别的。该抗体不但与产生此抗体的某种疟疾的CS蛋白结合，也能与其它种疟疾的CS蛋白质相结合。因为，免疫显性区外的CS蛋白的序列是广泛同质性的。一旦一种这样的肽被鉴定，其它具有同样性质的肽的氨基酸序列（或核苷酸序列）就能容易地通过比较不同种CS蛋白的序列而鉴定出来。这些肽对于制造合成疟疾疫苗是非常重要的成分。这些疟疾疫苗可用人工合成的方法，也可用遗传工程的技术来制造。

图1是诺（耳斯）氏疟原虫CS蛋白细胞内前体的图解。

图2是柏氏疟原虫（小白鼠）子孢子萃取物与本发明合成的N和C肽抗体相作用的Western免疫吸附放射自显影图。

图3是诺氏疟原虫和恶性疟原虫CS蛋白免疫显性决定基外的蛋白片段的图解。这些片段的排列达到高度的同质性。