[其他]促生长素的溶解和复性方法无效
申请号: | 86100915 | 申请日: | 1986-02-21 |
公开(公告)号: | CN86100915A | 公开(公告)日: | 1986-08-20 |
发明(设计)人: | 拉里·安德鲁·本特尔;詹姆斯·威廉·米切尔;斯蒂芬·布雷德利·斯托尔斯;格兰特·强岛本 | 申请(专利权)人: | 孟山都公司 |
主分类号: | C12N15/00 | 分类号: | C12N15/00;C12N1/38 |
代理公司: | 中国专利代理有限公司 | 代理人: | 罗宏 |
地址: | 美国密苏里州圣路*** | 国省代码: | 暂无信息 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 生长素 溶解 复性 方法 | ||
1、一种从宿主细胞的折射体内溶解得到促生长素蛋白并使之复性的方法,其特征在于,宿主细胞含所指的蛋白质,该蛋白质参与构成与其接触的所谓折射体,将折射体与一有效剂量和浓度的尿素或二甲砜的水溶液混合,并处于有效的PH条件下,就可完成对折射体的溶解,尔后,将含有所说蛋白质的溶液与一温和氧化试剂接触充分的时间,以使存在于所说蛋白质分子中的半胱氨酸残基形成分子内的二硫键。
2、一种将促生长素蛋白从一种含有该蛋白质的宿主细胞的折射体中溶出的方法,包括采用有效剂量和浓度的尿素或二甲砜,在有效PH水平与折射体接触而实现的对该蛋白的溶解。
3、在权利要求2的方法中,折射体是被溶解于尿素的水溶液中。
4、在权利要求3的方法中,溶解过程是在一种低于25℃、高于溶液冰点的温度中进行。
5、在权利要求3的方法中,溶解是在PH大于9以上进行。
6、权利要求3的方法中,溶解在PH大致为9到12之间进行。
7、在权利要求3的方法中,溶解是在PH大致为9到12之间,同时温度约为4℃时进行。
8、在权利要求3的方法中,宿主细胞是细菌大肠杆菌Escher-ichia CoLi的一个株系。
9、在权利要求3的方法中,溶解是在不用还原剂的情况下进行。
10、在权利要求3的方法中,溶解是在还原剂参与下进行。
11、在权利要求3的方法中,促生长素是牛促生长素或猪促生长素。
12、在权利要求11的方法中,宿主细胞是菌种Escherich-ia CoLi的一个株系。
13、在权利要求12的方法中,尿素浓度在约1摩尔到10摩尔之间,PH维持在约9到12之间,温度在溶液的冰点之上,25℃以下。
14、权利要求13的方法中,PH值用有效剂量的三羟甲基氨甲烷来维持在所说的PH范围内。
15、使促生长素蛋白复性的方法中,促生长素蛋白与尿素或二甲砜试剂接触,同时还要与温和氧化试剂接触一段时间,足以使其所含的半胱氨酸残基形成分子内的二硫键。
16、权利要求15的方法中,促生长素蛋白在尿素的水溶液中复性。
17、权利要求16的方法中,复性是在浓度为3到5摩尔的尿素中进行的。
18、权利要求16的方法中,复性是在PH大于9以上时进行的。
19、权利要求16的方法中,复性在PH大致为9到12时进行。
20、权利要求16的方法中,复性在温度高于溶剂冰点,低于25℃时进行。
21、权利要求16的方法中,复性过程中有还原剂参与。
22、权利要求16的方法中,复性过程中无还原剂的参与。
23、权利要求11的方法中,生长激素是牛或猪的生长激素。
24、权利要求23的方法中,复性是在浓度约为2和5摩尔的尿素中进行;温度高于溶液冰点,低于25℃左右;PH大致在9至12之间。
25、权利要求2的方法中,折射体是溶解在二甲砜水溶液里。
26、权利要求15的方法中,促生长素蛋白的复性在二甲砜的水溶液中进行。
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