[其他]抗血友病因子纯化方法

权利要求书

1、纯化蛋白质的方法，该方法是在选自糖、多羟基醇、氨基酸和盐的水合作用添加剂存在下，并且在添加剂的浓度是以使从柱上回收的上述蛋白质的回收率、纯度和分辨率中至少一项有显著增加的条件下，用柱层析使蛋白质纯化。

2、按照权利要求1所述的方法，其中所述柱层析法选自包括离子交换层析法，疏水性亲和层析法，疏水性/离子交换混合层析法，和它们的一系列混合方法。

3、按照权利要求1所述的方法，其中所述的蛋白质可选自抗血友病因子，血液凝聚因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ和Ⅹ，白蛋白和免疫球蛋白。

4、按照权利要求1所述的方法，其中所述水合作用添加剂是选自蔗糖、麦芽糖、乳糖、葡萄糖、核糖、阿拉伯糖、半乳糖、果糖、甘露糖、鼠李糖、棉子糖、松三糖、葡聚糖、木糖、阿洛糖、6-脱氧甘露糖和6-脱氧半乳糖的糖。

5、按照权利要求1所述的方法，其中所述水合作用添加剂是选自山梨醇、甘露糖醇、肌醇、核糖醇、赤藓醇、乙二醇、丙三醇、丙二醇、木糖醇、2-甲基-2，4-戊二醇、聚蔗糖和核糖醇的多羟基醇。

6、按照权利要求1所述的方法，其中所述水合作用添加剂是选自甘氨酸、β-丙氨酸和甜菜碱。

7、按照权利要求1所述的方法，其中所述水合作用添加剂是选自醋酸钠和醋酸钾、氯化钠、硫酸钠、氯化钠、氯化镁、硫酸镁、氯化铈和硫氰酸钾的盐。

8、按照权利要求1所述的方法，其中柱层析是离子交换柱层析。

9、按照权利要求8所述的方法，其中蛋白质是抗友病因子，并且所述柱层析是阴离子交换柱层析。

10、按照权利要求9所述的方法，包括所述因子用阴离子交换层析法纯化后，还要用疏水性亲和柱层析法进行第二次纯化。

11、按照权利要求8所述的方法，其中将水合作用添加剂用于柱层析，以增加所述蛋白质和离子交换材料在柱内的结合。

12、按照权利要求11所述的方法，其中将水合作用添加剂用于样品缓冲液中，以便选择性地增加所述蛋白质和柱之间的结合，因而促进在柱的离子交换材料上的吸附。

13、按照权利要求12所述的方法，其中水合作用添加剂在所述蛋白洗脱之前从柱上除去。

14、按照权利要求13所述的方法，其中所述蛋白质是抗血友病因子。

15、按照权利要求14所述的方法，其中所述添加剂是选自剂是选自蔗糖、麦芽糖、乳糖、葡萄糖、山梨醇和甘露糖醇。

16、按照权利要求15所述的方法，其中所述添加剂是蔗糖，并且它的浓度范围在约0.5和2.0摩尔之间。

17、按照权利要求15所述的方法，其中所述添加剂是麦芽糖，并且它的浓度范围在约0.2和0.4摩尔之间。

18、按照权利要求15所述的方法，其中所述添加剂是葡萄糖，并且它的浓度范围在约0.5和2.0摩尔之间。

19、按照权利要求15所述的方法，其中所述添加剂是山梨醇，并且它的浓度范围在约0.5和2.0摩尔之间。

20、按照权利要求12所述的方法，其中在加入含有所述蛋白质的生物液体样品到柱上之前，所述水合作用调节剂被加到所述柱平衡缓冲液中。

21、按照权利要求20所述的方法，其中所述树脂是四氨乙基阴离子交换树脂。

22、从血浆冷沉淀中纯化抗血友病因子的方法，该方法包括：

在选自葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖和山梨醇的添加剂存在下，在添加剂的量足以明显增加AHF对所述柱的表面结合亲和力的条件下，将上述冷沉淀装到阴离子交换层析柱上;

洗涤该柱，以便除去杂质;

从柱上消除添加剂;并且

洗脱和回收因子。

23、权利要求22的方法，其中阴离子交换柱是四氨乙基阴离子树脂柱。

24、权利要求23所述的方法，其中洗脱一步包括应用生理上可以接受的洗涤剂，以提高上述因子从柱上的解吸。

25、权利要求24所述的方法，其中所述添加剂是应用浓度范围在约0.5和2.0摩尔之间的山梨醇。