[其他]制备猪支原体的重组表面抗原及其疫苗的方法

说明书

本发明是关于猪支原体表面抗原;涉及以重组DNA的方法制备该抗原：在此抗原的基础上，制备猪支原体疫苗的方法;关于用此疫苗防治猪地方性兽病肺炎的处理方法，此外，在此抗原或此抗原的抗体的基础上，本发明还涉及用以发现猪群中猪支原体感染的诊断方法。

猪肺炎支原体（Mycoplasma    hyopneumoniae）是猪地方性兽病肺炎的病原，造成世界范围内猪的重要疾病。该病为慢性过程，非致命性疾患，各年龄组的猪都可得病，受感染的猪仅有轻度咳嗽和发烧的症状。但此种感染的经济影响是很大的，因为实际进食的减少，体重增加的减低，成为市场上的小个儿猪，致使蒙受重大经济损失。迄今，用疫苗控制此病或建立隔离病原猪群的努力尚未获得成功。

支原体与宿主细胞表面的物理性连接，是地方性兽病肺炎持久存在与发展的基础。如今在检定出猪肺支原体的媒介贴附宿主细胞的表面蛋白组分及其在感染过程中刺激自然生成抗体的基础上，提出抗地方性兽病肺炎的疫苗和对地方性兽病肺炎的诊断方法。

检定出上述表面蛋白DNA顺序编码后，可用适宜的表地载体，组成重组DNA分子，并将此重组DNA分子将适宜的宿主转化（例如，原核性或真核性宿主）。然后培养转化宿主，使其表达DNA顺序并制造出理想的支原体表面蛋白。

继之，将产生和分离出的表面蛋白与其它活性成分或它们的组合物，给猪注射，给药量应足够刺激抗体的生成，从而提供一种免疫猪，抗猪肺炎支原体感染的方法。这种疫苗的有效载体和适宜的给药方式，在兽医技术操作中是人所共知的。

本发明的表面抗原也是用于创造检测猪群中猪肺炎支原体感染诊断药盒的基础，例如，根据抗体检出本发明表面抗原的道理，可用诊断药盒在猪群中，每10或20个猪中抽取一个，常规地、经常地检查支原体感染是否存在。检查阳性，应对整个猪群用本发明的抗原尽早接种，以防止支原体的扩散。

本发明还关系于一些多肽和肽链，这些多肽和肽链是猪肺炎支原体细菌表面蛋白的一部分，当施用于猪时它们可刺激生成与猪肺炎支原体结合的抗体。

优选出的多肽选自：

NNNNEKKK;NNPESKSQDNANKGNYLSLNIGYRSFADKPDLLMVMMQSQKLYKNLVNRQLWLILSHKKQVKKECIENGQKIAKDLGE;

NSKMSLKNTEPNFFYGIYEKAIDKRFSLIDKIKI;

NSTVSETRDFIQKFQKFDIFYQENVGKIKEDLDFAIAPSFISLSLISKSLTKKLEIAAQNLSQFDSGAFTGEISGKMLQDLGTKYVI;和

NSGPVYGPFLPGEDKRELNPIVAKSANSITIDLNIITKTKLSERVAALSRVEF。

上述氨基酸编码中，字母符号所代表的氨基酸如下：

F：苯丙氨酸    L：亮氨酸

I：异亮氨酸    M：蛋氨酸

V：缬氨酸    S：丝氨酸

P：脯氨酸    T：苏氨酸

A：丙氨酸    Y：酪氨酸

H：组氨酸    Q：谷氨酰胺

N：天冬酰胺    K：赖氨酸

D：天冬氨酸    E：谷氨酸

C：半胱氨酸    W：色氨酸

R：精氨酸    G：甘氨酸

本发明还关系到重组DNA分子，用其制备上述肽链。以DNA顺序为特征的优选的重组DNA分子选自：

GAACAACAACAATGAAAAAAAAGAAATAATGCGTGATTTTTTTGAAAAGGGAAGAAAAGGCCTTTTTTTATTACCAGTTATATGGCCCTCTTTTC;

AAATAATCCTGAATCAAAATCGCAAGCTAATGCAAATAAAGGAAATTATCTTTCTTTAAATATTGGTTATCGTAGTTTTGCTGATAAACCTGACTTGCTGATGGTTTTATTACAGTCCCAAAAGTTGGTAAAGAACTTAGTAAATCEACAATTATGGCTGATCCTGTCCCATAAAAAACAGGTAAAAAAAGAGGACATCGAAAACGGGCAAAAAATAGCAAAAGACCTTGGTGAA;

GAATTCAAAGATGAGTTTAAAAAATACTGAACCTAATTTTTTTGTCGGCATCTATGAAAAGGCAATTGATAAACGTTTTTCTTTGATAGATAAAATTAAAATCG;