[其他]人促生长因子C的改进生产方法

说明书

本发明涉及一种确定DNA片段的方法，该DNA片断对转化这些DNA片段的宿主生产所需蛋白质或多肽为最适。本发明特别涉及到确定对生产人促生长因子C（“SMC”）为最适的并经过修饰的DNA片段。本发明还涉及到以这些DNA片段为特征的重组DNA分子和宿主以及使用这些DNA片段、重组DNA分子和宿主来提高人促生长因子C或来源于真核和原核生物的其它蛋白质的生产方法。

人促生长因子C是一种类似于胰岛素的生长因子，在垂体分泌生长激素后，它是激发组织生长的关键蛋白质。

人促生长因子C的氨基酸顺序是由E.Rinderknecht和R.E.Humble在J.Biol.Chem.，253，pp.2769-76（1978）上报道。它是由一条含有70个氨基酸的单链多肽经3个二硫键联结而成。计算出的分子量为7649。促生长因子C的结构与胰岛素前体很相似，例如，促生长因子C第1-29个氨基酸相当于胰岛素B链，第42-62个氨基酸相当于胰岛素A链。然而，促生长因子C中的联结链却与胰岛素前体的C肽链不相似，促生长因子C还有1个在胰岛素前体中不存在的位于C端的8肽。

促生长因子C在体外表现出强烈的生长促进作用，如它能促进DNA、RNA、蛋白质和糖蛋白的合成〔E.Rinderknecht    and    R.E.Humble，Proc.Natl.Acad.Sci    USA，73，pp.2365-69（1976）;B.Morell    and    E.R.Froesch，Eur.J.Clin.Invest.，3，pp.119-123（1973）;E.R.Froesch    et    al.，Adv.Mental.Disord.，8，pp.211-35（1975）;A.E.Zingg    and    E.R.Froesch，Diabetologia，9，pp.472-76（1973）;E.R.Froesch    et    al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，73，pp.2904-08（1976）〕。它还能促进鸟氨酸脱羧酶和细胞增殖〔B.Morrel    and    E.R.Froesch，supra;G.K.Haselbacher    and    R.E.Humble，J.Cell.Physiol.，88，pp.239-46（1976）〕。在生物体内，促生长因子C有促进因垂体切除而造成的生长激素缺乏症的老鼠生长的作用。〔E.Schoenle.et    al.，Nature.296，pp.252-53（1982）〕

象生长激素一样，促生长因子C也有一定程度的物种特异性。然而，从一种生物提出的促生长因子C对在进化地位较低的种类可以具有生物学活性，例如，人们相信人促生长因子C在促进牛、猪和鸡的生长中有一定的作用。对实验动物，促生长因子C表现出来的促进生长作用与天然人生长激素的作用相同。但是，人们认为促生长因子C优于人生长激素，因为促生长因子C是生长反应中的中枢调节因子。因此，同生长激素相比，促生长因子C是生长的更加直接的调节因子。

促生长因子C除了可以治疗某些形式的生长失调如侏儒症、肌肉萎缩外，还可用于刺激特殊部位的组织生长，如伤口愈合、组织损伤和骨折的愈合。

然而，由于促生长因子C只能从人类血液中提取，得到的数量很少，它作为组织生长促进因子在医学上的可能应用受到很大限制。因而，需要用其它方法来制取具有商业和医用价值的足够多的促生长因子C。

一种方法是：利用重组DNA技术，将编码促生长因子C的DNA片段转化到宿主中，由宿主来生产促生长因子C。然而，由于转化后的各种大肠杆菌宿主的促生长因子C表达产量很低，从经济上考虑无法进行商业生产。

本发明对上述问题的解决方法是：用一种方法来确定这样的DNA片段，该片段对转化有这些DNA片段的宿主生产促生长因子C或其它所需原核、真核生物蛋白质或多肽为最适。经过这个方法选择出来的经过修饰的DNA片段编码这些蛋白质的表达一具体在本发明优选实施方案为促生长因子C，并且可在各种宿主中进行有效的高水平生产。因此，借助于本发明的方法，人类有可能首次得到具有促生长因子C的促进和调节生长作用的多肽，并且其数量足以供应医学应用所需。

以下的描述将说明，按本发明的优选实施方案，本发明的新DNA片段和重组DNA分子能够在合适的宿主内生产出大量的促生长因子C或类似于它的多肽。由此获得的多肽在人、牛、猪和鸡体内具有广泛的促进和调节生长的作用。