[其他]以亲和力层析法纯化血红素及改良血红素

权利要求书

1、一种由含(氧)血红素溶液或混合物隔离(氧)血红素之方法，包括：

(a)制动一多元阴离子特定的束缚血红素经由其多元阴离子束缚处于一层析的凝胶；及

(b)经由凝胶传送该含(氧)血红素溶液或混合物，其中该(氧)血红素保留于凝胶上，而同时溶液或混合之其他成份被洗提(eluted)。

2、一种由（氧）血红素溶液或混合物隔离（氧）血红素之方法，包括：

（a）提供一层析的凝胶它具有一制动多元阴离子，特定的经由其多元阴离子束缚处束缚血红素;及

（b）经由凝胶传送含（氧）血红素溶液或混合物，其中（氧）血红素是选择上保留于凝胶上，而同时其他成份经由此传送。

3、如权利要求第1项或第2项所述之方法，其中该多元阴离子由下列所选择，包括核苷三磷酸盐（nucleoside  triphosphate），1，3-二磷酸甘油酸盐（diphosphoglycerate），一肌醇磷酸盐及一肌醇硫酸盐（inositol  sulphate）。

4、如权利要求前项所述之方法，其中该层析的凝胶是由下列所选择，包括了交联聚蔗糖凝胶（cross  linked  polysaccharide  gels）及矽胶（silica  gel）。

5、如权利要求前项所述之方法，其中该多元阴离子是藉一疏水性化学空间群连接至层析的凝胶。

6、如权利要求第5项所述之方法，其中该空间群是由下列之剂类选择，包括己二酸（adipic  acid），二氨基己烷及己二酸二肼（adipic  acid  dihydrazine）。

7、如权利要求前项所述之方法，其中该多元阴离子是三磷酸腺苷（adenosine  triphosphate）或肌醇四或戊磷酸盐。

8、如权利要求前项所述之方法，其中该凝胶为琼脂糖凝胶（agarose  gel）。

9、如权利要求第8项所述之方法，其中所述化学空间群剂为己二酸。

10、如权利要求第1项或第2项所述之方法，其中包括了随后之步骤：

（c）引入一阴离子进入层析的凝胶，它与在原有凝胶之多元阴离子竞争，其中（氧）血红素由凝胶被洗提。

11、如权利要求第10项所述之方法，其中该竞争阴离子，由递减效能是从下列选择包括肌醇己磷酸盐，三磷酸腺苷，吡哆醛磷酸盐（pyridoxal  phosphate），二磷酸甘油酸盐，二磷酸腺苷，磷酸盐离子及氯离子。

12、一种由一液体溶液含无基质血红素中分离无基质血红素（stroma-free  hemoglobin）的方法，包括：

（a）经由一凝胶复合物传送含溶液无基质血红素，它包括一层析的凝胶具有制动一多元阴离子，特定的束缚血红素经由多元阴离子束缚处;及

（b）引入一阴离子进入该凝胶复合物，它与原先含于凝胶中之多元阴离子竞争，其中纯化了的无基质血红素由凝胶被洗提。

13、如权利要求第12项所述之方法，其中于步骤（b）所引入之阴离子及无基质血红素溶液两者皆包括一适当缓冲剂，它并不干扰血红素之束缚于多元阴离子。

14、一种由一液体反应混合物含改良的及未改良的血红素分离未改良的血红素之方法，包括：

（a）经由一多元阴离子/层析的凝胶复合物传送该反应混合物，复合物含一多元阴离子它特定的束缚血红素经由其多元阴离子束缚处，在一层析凝胶上制动，其中未改良血红素是保留在凝胶上而改良的血红素经过该凝胶;及（b）引入一多元阴离子进入凝胶复合物，它与原先在凝胶之多元阴离子竞争，其中纯化的未改良血红素由凝胶洗提出。

15、如权利要求第14项所述之方法，其中所述之多元阴离子/层析的凝胶复合物为ATP-琼脂糖凝胶（ATP-agarose  gel）。

16、如权利要求第14项或第15项所述之方法，其中该竞争阴离子以递减有效能由下列选出，包括肌醇己磷酸盐，三磷酸腺苷，吡哆醛磷酸盐，二磷甘油酸盐，二磷酸腺苷，磷酸盐离子及氮离子。