[其他]用于固相肽合成的新载体

说明书

本发明属于有机化学。

固相合成肽的载体主要分为两大类：有机载体与无机载体，与有机载体相比。无机载体具有一些特殊优点：在常用溶剂中不溶胀，避免了载体在不同溶剂中体积不同造成的困难;由于接肽反应在固体表面进行，改善了反应物的扩散状态。因而能更方便地用于肽的柱上合成和自动化合成。近年来，发展了一种带有化学键合酯化层的无机载体，这种载体综合了无机载体和有机载体的优点。〔①Angew    Chem    Int    Eo，11.314（1972）;②“高效液相色谱的固定相”，科学出版社，1161，（1983）〕。但由于具有所需要能团的硅烷化合物不易制得，使载体的种类较单一，不能象有机载体那样灵活地变换手臂，获得性能各异的载体;另一方面，无机载体的氨基酸一般较少。

为克服上述困难，本发明以氨基含量较高的氨丙基硅球为合成起点，制备新型载体。氨丙基硅球由于有活泼氨基，具有与多种有机化合物反应的能力，当不断改变连接氨丙基硅球和氨基酸之间的连接试剂，能方便地获得性能各异的固相肽合成载体。

在本发明中，我们合成了下述载体：

合成路线如下：

其中，ω-溴苯乙酮（Ⅱ）溶于乙酸乙酯，加热至50-60℃，在三乙胺存在下与逐次投入的对溴甲基苯甲酸（Ⅰ）进行反应，纯化后得一白色晶体，对溴甲基苯甲酰甲基酯（Ⅲ）。化合物Ⅲ在二环己胺存在下与叔丁氧羰酰甘氨酸在二甲基甲酰胺（DMF）中50℃左右反应5小时，得叔丁氧羰酰-甘-甲氧基苯甲酸）酯（Ⅳ）。将Ⅳ溶于冰醋酸/水中，室温下用锌粉还原6小时，得叔丁氧羰酰-甘-4-（甲氧基）苯甲酸（Ⅴ）。Ⅴ的二氯甲烷溶液与多孔硅球在二环乙基碳二亚胺（DCC）存在下室温震荡20小时，即得载体叔丁氧羰酰-甘-（甲氧基）苯甲酰氨丙基多孔硅球（Ⅵ）。

我们用这种载体在柱上合成了三种短肽：Boc-Pro·Leu·GlyoMe，Boc-Ala·Pro·GlyoMe和Boc-Ala·Pro·Gly·Ala·Pro·GlyoMe，产率分别为97%，98%和84%。

这种新型载体由于采用氨丙基硅球作起始原料，制备简便，可变性大。这种合成技术路线可用于制备结构、性能各异的无机载体，开拓了无机载体广泛应用的前景。

实例1：

对一溴甲基苯甲酸苯甲酰甲基酯（Ⅲ）

在反应瓶中投入α-溴苯乙酮（Ⅱ）388（0.18mol），三乙胺17.9g（0.18mol），乙酸乙酯900ml，加热搅拌，浴温50-60℃。将对溴甲基苯甲酸（Ⅰ）35.2g（0.177mol）逐次加入，约3小时投完。继续搅拌2小时。瓶底有淡黄色沉淀，静置过夜，滤除沉淀。滤液用10%的柠檬酸水溶液（130ml×4）、饱和氯化钠水溶液（120ml×4），饱和碳酸钠水溶液（120ml×4）洗，无水Na₂SO₄干燥过夜后，蒸除溶剂，得一黄色固体。将此固体与体积比为4∶3的CH₂CH₂/石油醚（150ml+200ml）流溶解，冷却，置冰箱过夜，得一白色结晶，重18.5g，产率31.4%，m·P·142-143℃，NMR：4.50（2H·CH₂Br）;5.4（2H·CH₂CO）;7.3-8.2（9H·C₆H₄和C₃H₅），元素分析结果为：计算值C：57.7;H：3.90;实测值C：57.53;H：4.2。

实例2：

叔丁氧羰酰-甘-（甲氧基）苯甲酸（苯甲酰甲基）酯（Ⅳ）

将（Ⅲ）4g（0.01mol），二环己胺5g（0.024mol）及BocGly4.2g（0.024mol）溶于100mol二甲基甲酰胺（DMF）其摩尔比为1∶2∶2.50℃左右搅拌反应5小时，静置过夜，滤除沉淀，滤液减压旋转蒸去溶剂DMF，将其黄色残余物与乙酸乙酯流2小时，冷却后滤除少量白色不溶物（DCHA·HBr），乙酸乙酯溶液用10%的柠檬酸水溶液（150ml×3）洗去DCHA，用水（150ml×3）洗，用PH9.5的碳酸钾/碳酸氢钠的缓冲溶液（各配为0.5M的溶液，按体积比1∶2混合）（150ml×3）洗去过量的BocGly水洗（150ml×3），无水硫酸镁干燥过夜，减压旋转蒸去乙酸乙酯，得一黄色固体，重4.5g。

实例3：

叔丁氧羰酰-甘-4-（甲氧基）苯甲酸（Ⅴ）