[其他]利用啤酒酵母基因BAR1分泌异种蛋白的方法

权利要求书

1、一种DNA构建体，其特征在于它包括一部份啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)BRA1基因，其中包括该基因信号肽的编码序列，至少一个对于所选择的宿主来说的外来结构基因及一个启动子、该启动子在用所述DNA转化的所述宿主中控制一种融合多肽或由所述部份BAR1基因及所述结构基因编码的蛋白的表达。

2、根据权利要求1的构建体，其中所述融合多肽或蛋白包括一个KEX  2后加工位点。

3、根据权利要求2的构建体，其中所述BAR1基因的所述信号肽编码序列已被改变，以降低融合多肽或蛋白的信号肽酶的裂解效率。

4、根据权利要求1的构建体，其中所述启动子是一种酵母糖酵解途径基因的启动子。

5、根据权利要求1的构建体，其中所述启动子是从啤酒酵母BAR1启动子、啤酒酵母乙醇脱氢酶Ⅰ启动子和梨酒酵母（Schizosaccharomycls  pombe）乙醇脱氢酵启动子中选择出来的。

6、根据权利要求5的构建体，其中所述构建体是pZV30、pZV31、pzV49和pZV50中选择出来的。

7、根据权利要求1的构建体，它进一步包括啤酒酵母磷酸丙糖异构酶基因的转录终止区。

8、根据权利要求1的构建体，其中所述部份所述BAR1基因进一步包括邻接转录起始位点的5′端非转录区的680碱基对的序列。

9、一种含有根据权利要求1-8中任一项的构建体的转化细胞。

10、根据权利要求9的转化细胞，其中所述细胞是真菌细胞。

11、根据权利要求10的细胞，其中所述真菌是啤酒酵母。

12、根据权利要求10的细胞，其中所述真菌是梨酒酵母。

13、根据权利要求10的细胞，其中所述真菌是曲霉菌（Aspergillus）或脉胞菌（Neurospora）。

14、一种在转化细胞中生产异种蛋血和将所述蛋白引向细胞分泌途径的方法，其特征在于该方法包括下列步骤：

（a）用DNA构建体转化一种宿主细胞、该DNA包括一部份啤酒酵母BAR1基因，其中至少包括信号肽编码序列、编码所述异种蛋白的结构基因及启动子、该启动子在所述细胞中控制包括所述信号肽和所述异种蛋白的融合蛋白的表达。

（b）在适于为生产所述融合蛋白进行选择的生长条件下，培养步骤（a）中所述的细胞。

15、根据权利要求14的方法，其中所述细胞是真菌细胞。

16、根据权利要求15的方法，其中所述真菌是啤酒酵母。

17、根据权利要求15的方法，其中所述真菌是梨酒酵母。

18、根据权利要求15的方法，其中所述真菌是曲霉菌或脉胞菌。

19、根据权利要求14的方法，其中所述融合蛋白包括一个KEX2后加工位点。

20、根据权利要求19的方法，其中所述BAR1基因的所述信号肽编码序列已被改变、以降低多肽或蛋白的信号肽酶的裂解效率。

21、根据权利要求14的方法，其中所述启动子是从啤酒酵母BAR1启动子、啤酒酵母乙醇脱氢酶Ⅰ启动子和梨酒酵母乙醇脱氢酶启动子中选择出来的。

22、根据权利要求14的方法，其中所述启动子是酵母糖酵解途径基因的启动子。

23、根据权利要求22的方法。其中所述DNA构建体是从pZV30、pZV31、pZV49和pZV50中选择出来的。

24、根据权利要求14的方法，其中所述异种蛋白从所述细胞中被输出。

25、根据权利要求14的方法，其中所述蛋白包括胰岛素原或胰岛素。

26、一种根据权利要求14的方法所产生出来的蛋白质。

27、一种根据权利要求14的方法生产出来的蛋白质，它包括人胰岛素原或胰岛素的氨基酸序列。