[其他]直接将DNA插入质体和线粒体

权利要求书

1、将含有一个或多个具有在质体或线粒体中行使功能启动子的基因的DNA直接引入到植物细胞原生质体中的质体或线粒体中的方法。

该方法包括将上述DNA暴露于悬浮在基质中的原生质体，在该基质中DNA在足够的时间内渗入原生质体和原生质体中的质体或线粒体，而不必将原生质体暴露于病源菌。

2、根据权利要求1的方法，包括从转化原生质体再生植物细胞的步骤。

3、根据权利要求2的方法，进而包括从植物细胞再生整株植物。

4、根据权利要求1的方法，其中DNA是线性的。

5、根据权利要求1的方法，其中的DNA是一个质粒。

6、根据权利要求5的方法，其中质粒含或不含一个或多个T-DNA边缘区。

7、根据权利要求1的方法，其中的DNA含有一个能给质体和线粒体提供除草剂抗性的基因。

8、根据权利要求7的方法，其中的除草剂是阿特拉津。

9、根据权利要求7的方法，其中的DNA提供除草剂抗性和第二个农学上有的性状（特征）。

10、根据权利要求1的方法，其中的DNA包括一个可选择的标记基因和一个提供农学上有用性状的基因。

11、根据权利要求10的方法，其中可选择的标记基因提供抗生素抗性。

12、根据权利要求11的方法，其中的抗生素是氯霉素或卡那霉素。

13、根据权利要求10的方法，其中农学上有用的性状是抗除草剂。

14、根据权利要求13的方法，其中的除草剂是阿得拉津。

15、根据权利要求1的方法，其中的基因是嵌合体。

16、根据权利要求1的方法，其中的DNA包括一个复制信号。

17、根据权利要求1的方法，其中的DNA包括一个整合信号。

18、根据权利要求1的方法，其中的植物细胞原生质体是一个叶细胞原生质体。

19、根据权利要求1的方法，其中的基质是一种渗透性稳定的原生质体培养基。

20、根据权利要求1的方法，其中的基质包括植物耐受的二价阳离子。

21、根据权利要求20的方法，其中的二价阳离子是镁离子或钙离子。

22、根据权利要求1的方法，其中的基质包括多元醇，这种多元醇能修饰原生质体膜和促进细胞融合。

23、根据权利要求22的方法，其中的多元醇是聚乙二醇，聚丙烯乙二醇或聚乙烯醇。

24、根据权利要求23的方法，其中的多元醇是聚乙二醇。

25、根据权利要求24的要求方法，其中的聚乙二醇分子量为1000到10，000。

26、根据权利要求1的方法，其中的DNA和原生质体接受热振荡。

27、根据权利要求1的方法，其中的DNA和原生质体接受电击。

28、根据权利要求1的方法，其中DNA引进原生质体是通过至少结合下述方法的两个完成的：聚乙二醇处理，热振荡和电击。

29、根据权利要求28的方法，其中的基因转移首先是通过将外源基因和原生质体导入某一溶液，然后将悬液先接受热振荡，再用聚乙二醇处理完成的。

30、根据权利要求28的方法，其中的基因转移是通过先将外源基因和原生质体导入某一溶液，然后将悬液先接受热振荡，再用聚乙二醇处理，最后接受电击。

31、根据权利要求1的方法，其中的基质包括能用来修饰原生质体膜而促进细胞融合的多元醇，DNA和原生质体至少接受电击或热振荡一种处理。

32、根据权利要求1的方法，进而包括使细胞外核酸酶失活的步骤。

33、根据权利要求1的方法，其中的原生质体来自禾木科，茄科，十学花科的植物细胞。

34、根据权利要求33的方法，其中的原生质体来自禾本科植物的细胞。