[其他]两性分子与单克隆或多克隆抗体结合用于放射显影和治疗

说明书

总的说本发明是关于两性分子的应用，尤其是涉及用诸如阴离子去污剂等两性分子来增加毒素、放射性同位素和药物的免疫结合物的溶解度和降低结合或未结合的单克隆抗体的非特异性吸收。

近年来应用单克隆抗体作为靶子或给药载体促使各种新的抗癌办法的出现。其中办法之一是应用未结合抗体的血清治疗，也就是抗体与放射性同位素，药物或毒素结合，其结合物称为“免疫结合物”。有各种将这些制剂与抗体偶联的方法，例如：通常用的毒素法。它是把二硫基团引入抗体而把硫氢基团引入毒素，接着，通过一个共价二硫键形成免疫毒素。这种改变通常增加结合物的疏水性和促进它们的凝聚，甚至沉淀。尽管人们努力控制抗体取代的程度，结合物在贮藏期间经常不稳定，并自发地沉淀，结果降低了效价、稳定性和治疗效果。按照惯例，控制免疫结合物溶解度的唯一方法是控制不同的双功能配体的取代程度。可是，这种技术有一个最大缺点，即限制了毒素与抗体结合的数量，同时在抗体与毒素中取代像赖氨酸那样的功能基团方面是互相矛盾的。此外，某些未结合的抗体如：IgG亚族的抗体，每次从腹水或用过的培养基中提纯时都很难溶解。像已分离出的抗体那样，它们在4℃贮藏或在-70℃重建时能自发地沉淀。于是这些抗体亚族产生高度不溶解和不稳定的免疫毒素。尽管有很多不同方法使药物、同位素和毒素连结到抗体上，但大多数方法都有一个类似的溶解度的问题。

在制备免疫毒素结合物时，还存在进一步的问题。例如：最常用的毒素是由两条多肽链，即A链和B链组成，它们通过二硫键相连接。毒素通过B链上的识别部位结合到细胞表面的受体上，而A链则穿透（或是易穿过）细胞膜进入胞浆，它在那里抑制蛋白质的合成。大多数免疫毒素是用A链单独地连接到特异抗体上而形成的，但应用完整毒素有很多潜在的优点。典型的完整毒素结合物比单独用A链制备的结合物制剂具有更高的效价。这里因为B链在免疫毒素的内部化中履行一个重要角色，它是免疫结合物限定效价的因素。实际上，内部化的增加将转变为效价的增加。此外，如果在试图制备结合物之前就必须把A链与B链分开的话，那么免疫毒素的制备就更加困难。这些涉及到的亲合纯化步骤和为把分子内二硫键打开而降低A链与B链结合的步骤。这使制造完整毒素制剂，使其具有抗原性细胞的选择性效价的方法存在着很多限制。Thorpe等人（见Immun.Rev.62：119-159，1982）证实用完整毒素与抗体结合可以生成选择性免疫结合物，它可简单地将完整毒素通过N-琥珀酰亚胺基-3-（2-吡啶基硫代）丙酸酯（SPDP）与抗体结合，一定百分率的免疫毒素分子封锁了不能与糖类结合的B链，从而不能调节对不携带抗原的肿瘤细胞或正常细胞的毒性。亲和层析能够除去与B链结合的分子，该分子仍保留与糖类结合的能力。可是，即使在完全除去之后，某些免疫毒素的制剂仍具有高水平的非特异性和毒性。其原因尚不清楚。

除免疫结合物的溶解度和毒素以外，当用于体内时，单克隆抗体和它们的结合物非特异性摄入到网状内皮系统（RES）各器官如：肺、肝、脾和骨髓中限制了它们的潜在效价，从而降低了治疗指数。RES的成分同样存在于许多其它组织，包括淋巴结、扁桃腺和小肠。FC受体可被考虑是单克隆抗体及其结合物被非特异性摄入RES器官的主要部分。另一些体体系如：Cb或Cd受体，免疫复合受体和糖类或糖蛋白受体同样可参于是抗体的非特异性吸收。已经证实，糖类受体也结合毒素分子上的残基，从而可加强免疫结合物的非特异性摄取。

目前，用酶破碎抗体是降低受体调节摄取的标准技术。然而，该方法无论对放射标记的抗体制备及免疫结合物的制备均有一些缺点。

首先，酶破碎抗体FC部分的方法从质和量的控制上都很困难，因为必须要测定抗体制剂中残留的酶。其次，已证实F（ab）₂片段与完整抗体比较增加了降解率。第三，用F（ab）′或Fab（抗体单价片段）有一个附加的缺点，即由于抗体只通过一个结合点结合，对抗原的亲合力大大地降低。此外，配位体取代到抗体片段中比到完整抗体中受到更多的限制，但增加了取代到抗原结合部位的可能性，从而将降低片段的免疫活性。还有一些研究证实了用片段比用完整抗体稳定地增加了摄入肿瘤中的量，而降低了在RES器官中的积累。

在纯化单克隆抗体时经常遇到的另一个问题是内毒素的污染。在某些情况下，内毒素与抗体一起被纯化，好像它被结合到单克隆抗体上了。在这种情况下，用常规方法将内毒素与抗体分离是不成功的，因为除去内毒素时也除去了抗体。由于内毒素乙引起高烧甚至休克，所以这些污染的抗体制剂就不能用于病人。