[其他]肽定序的方法

权利要求书

1、测定一种多肽末端氨基酸种类的一种方法，包括：

b)将所说的末端氨基酸与在所说的试剂上的所说的c部份偶合；

c)除去过量的试剂；

d)从剩余的上述多肽上裂解出上述试剂-末端氨基酸复合物；

e)将剩余的上述多肽与上述试剂-末端氨基酸分离；

f)将上述试剂末端氨基酸复合物转化成一种稳定的化合物；并且

g)鉴定此转化了的末端氨基酸。

2、权利要求1的方法还包括重复进行权利要求1的步骤，对从上述f步骤中获得的上述剩余的多肽，进行多肽或蛋白质的定序，从而鉴定每一个循环的剩余的多肽的末端氨基酸。

3、权利要求1的方法，其中的步骤c还包括：

（ⅰ）将步骤b的反应混合物与一种具有下列化学式的清除剂分子进行反应：

H₂N-〔〕-SH，式中〔〕是一个烷基、芳基或全卤化了的烷基或芳基，反应是在有利于上述NH₂部份与上述过量的试剂的上述c部分之间发生反应的条件下进行;

（ⅱ）将步骤（ⅰ）的产品与固定化的有机汞制剂混合，以便结合过量的清除剂分子与清除剂分子-试剂复合物;及

（ⅲ）除去未固定的试剂-多肽复合物。

4、权利要求3的方法，其中清除剂是选自含有H₂N-苯基-SH，H₂N-苯基-CH₂-SH，H₂N-CH₂-CH₂-SH，及其全卤化衍生物的化合物组。

5、权利要求4的方法，其中所说的清除剂是（甲巯基）苯胺。

6、权利要求3的方法，其中所说的固定化的有机汞制剂包括键合到一种固定化的硅胶上的苯基汞氢氧化物。

7、权利要求1的方法，其中步骤e还包括将步骤d的反应混合物与一种固定化硼酸混合，并除去未固定化的物质。

8、权利要求7的方法，其中所说的固定化硼酸是将苯基硼酸键合到硅胶上。

9、权利要求8的方法，其中所说的步骤e（ⅲ）包括用含水酸处理上述的固定化硼酸，以从其中除下所说的试剂-氨基酸复合物。

10、权利要求3，4，5，及6的方法，其中将上述的有机汞制剂基质放置在一条柱中。

11、权利要求7，8及9的方法，其中上述固定化的硼酸是被放置在一条柱中。

12、测定一种多肽的N-末端氨基酸种类的一种方法，包括：

a）获得2，3-二羟基马来酰亚氨-4′-异氰酸苯酯（DHMPITC）;

b）将上述多肽的末端氨基酸偶合到上述的DHMPITC上;

c）将（甲巯基）苯胺加到步骤b所说的反应混合物中;

d）在含有N-苯基硼酸-N′-丙基正硅烷基脲（PBA）的柱上洗提上述步骤c的反应混合物;

e）在无水酸的条件下裂解步骤d的洗提液;

f）将步骤e的反应混合物加到含有N-苯基硼酸-N′-丙基正硅烷基脲（PBA）的柱上;

g）在含水酸的条件下，将由步骤f得到的固定化产物从PBA柱上洗脱;

h）将从步骤g所得的洗脱液转化成稳定的苯基乙内酰硫脲氨基酸衍生物;以及

i）鉴定步骤h的产物。