[其他]赤豆叶肉原生质体分离培养与绿苗分化技术

权利要求书

1、一种从赤豆无菌苗游离和培养叶肉原生质体的方法，其特征是原生质体培养基成份中采用0.5至0.65M浓度的葡萄糖作为碳源和渗透压稳定剂，原生质体分裂形成愈伤组织，再扩增，分化成绿苗。

2、按照权利要求1所述的原生质体培养基，其特征是培养基的无机盐成份中含有600-1000mg/L的CaCl₂·2H₂O，1200-1500mg/L的KNO₃，200-300mg/L的NH₄NO₃，60-90mg/L的KH₂PO₄，600-900mg/L的MgSO₄。

3、按照权利要求1所述的原生质体培养基，其特征是培养基的维生素成份中含有0.02-0.08mg/L的生物素，0.1-0.8mg/L的叶酸，100-200mg/L的肌醇，3.0-3.5mg/L的盐酸硫胺素，0.5-0.8mg/L的盐酸吡哆素，1.0-2.0mg/L的甘氨酸，3.0-4.0mg/L的烟酸。

4、按照权利要求1所述的原生质体培养基，其特征是培养基的植物激素成份中含有2，4-二氯苯氧乙酸，α-萘乙酸，6-苄氨基嘌呤和玉米素，上述植物激素的用量各为0.3-1mg/L。

5、按照权利要求1所述游离原生质体的方法，其特征是混合酶解液成份中含有0.5%-1%（W/V）的纤维素酶，0.5%-1%（W/V）的半纤维素酶，酶解叶片的温度是25°-27℃，经酶解12-16小时后用400目不锈钢丝网过滤得原生质体。

6、按照权利要求1所述的游离原生质体的方法，其特征是原生质体的取材来自生长11-16天，生理状态良好的无菌苗真叶。

7、按照权利要求1所述的原生质体诱导愈伤组织扩增的方法，其特征是扩增培养基中含有0.2-0.5mg/L的6-苄氨基嘌呤，1-3mg/L的2，4-二氯苯氧乙酸，每10-15天转接一次。

8、按照权利要求1所述的愈伤组织分化方法，其特征是分化培养基的植物激素成份中含有1-5mg/L的6-苄氨基嘌呤。

9、按照权利要求1所述的愈伤组织分化培养的方法，其特征在于采用先短周期转接，后长周期转接相结合的方法。

10、按照权利要求1所述的愈伤组织分化培养方法，其特征在于愈伤组织是在长波长500-700nm的生长灯的光照下分化的。