[其他]免疫球蛋白溶液的巴氏灭菌法

说明书

本发明与免疫球蛋白的溶液加热有关，加热的目的在于减少或消除这些物质在临床使用时的病毒传染的危险和减少可能伴发的引起临床付反应的酶污染，同时又没有附随物质对免疫球蛋白的结构和功能有害影响。

商业免疫球蛋白制剂主要包含免疫球蛋白G（IgG）分子，广泛地用于无γ球蛋白症和低γ球蛋白症、抗病原生物体的被动免疫法，予防Rh过敏症和处置象突发性血小板减少性紫癜（ITP）的自体免疫疾病的替代疗法。给药的主要途径是通过静脉或肌肉注射。然而，已有报导说通过静脉注射大剂量的免疫球蛋白会传染NonA    NonB（NANB）肝炎和可能的其他病毒传染病。

免疫球蛋白通常是利用科恩（Cohn）冷酒精法（见美国专利No2390074），用离子交换色谱法或其他已公开的方法从血浆或胎盘血分离，这些方法所依据的是所含蛋白质的物理、化学或免疫的性质。

几种操作方法正用于由于粗心而污染了抗血友病因子A（Factor    VIII）的浓缩物以及其他用人体血浆混合物制造的蛋白质制剂的病毒失活，例如免疫球蛋白溶液。使用“蒸汽”、“干燥加热”或“化学”处理，例如用β-丙酰基内酯（BPL）和紫外照射或者胆酸酯/三硝基丁基磷酸酶（TNBP）等方法都已经尝试过。在低温干燥状态（或干加热处理）在60℃加热72小时的抗血友病因子A的浓缩物曾把NANB肝炎传染给13个患有血友病的接受者当中的11个（见Colombo    M.等，Lancet    1985;2：1-4）。在20个接受在潮湿状态和部分蒸汽压力下加热过的浓缩物的病人中，没有出现NANB肝炎，而出现了3例B型肝炎（见Schimpf    K.等New    England    J.of    Medicine，316，918〔1987〕）。然而这些方法都不能免除肝炎的传染。使用BPL/紫外线辐射，在消除病毒传染的同时，可能导致蛋白质分子的化学改性和形成可能引起临床反应的新抗原。

实验室研究表明，胆酸酶/TNBP在消除来自聚集产物的类脂包被的病毒方面是非常有效的。一个涉及七个事先没有接触过血浆制品的病人的有限的临床研究表明没有发生肝炎传染（见Horowitz，M.S.等，Thrombosis    and    Hemostasis，58（1）P.371〔1987〕）。然而，这个方法只能应用于破坏类脂包被的病毒，很遗憾，而后要除去在这个方法中所应用的化学物质却是困难的。

众所周知，巴氏灭菌法，即对溶液加热，对于病毒和其他生物体的失活是很有效的。把巴氏灭菌法应用于牛奶，通常是71.7℃进行15秒钟（见Pelczar    M.J.等，Microbiology，4th    Ed.，McGraw-Hill，1977，PP.833-835）。这种处理表明它使结核丝杆菌有效地失活，该菌大概是现今抵抗力最大的病原体了。用巴氏灭菌过的普通血清白蛋白，在超过35年的期间内，还不曾听说过有传染任何血清肝炎或其他病毒的病例（见Edsall，J.T.，Vox    Sang.46：338-340〔1984〕）。抗血友病因子A（Factor    VIII）浓缩物的巴氏灭菌法，在存在象糖和氨基酸这样稳定剂的情况下，大大地减少了肝炎的传染（见Schimpf，K.等，同上）。抗凝血酶Ⅲ-另一种血浆制品在有0.5M柠檬酸存在的情况下的巴氏灭菌法，多年来一直是一种必要的操作，自从它应用以来，没有报导过有肝炎传播的情况。

因此，免疫球蛋白溶液的巴氏灭菌法使病毒失活的可能性会是引人注目的。然而，人们知道IgG的分子在溶液中加热时会聚集（见Rosenqvist，E.等，Molecular    Immunology，24，No.5，PP.495-501〔1987〕）。事实上，在63℃下将IgG溶液加热15分钟是一种生产可溶性IgG聚集体（aggregates）的广泛使用的方法。这种聚集体具有类似于抗原抗体复合体的性质，也就是说它们将补体固定，结合在巨噬细胞上，引起阿图斯（Arthus）反应（见Christian，C.L.，J.Immunology    84，112-121）。利用聚集的IgC分子Fc段活化补体系统导致了许多生产一种用于静脉注射的可溶的IgG的尝试，或者可以通过改善IgG与血浆的分离步骤，或者通过改性或切除Fc段（见McClelland    D.B.L.，Yap    P.L.，Clinics    in    Haematology    13，No.1    Feb.1984）。