[其他]免疫势差

说明书

本发明涉及一类连接到免疫原上能增强宿主对该免疫原应答的分子，无论复合物是肠胃外施用、肠内施用或口服都有此效应。

ATCC    67331是一株大肠杆菌，于1987年3月2日寄存在美国标准菌种收集中心（12301    Parklawn    Drive，Rockville，MD20852，USA）。

为了保护动物抵抗病原体（细菌、病毒或寄生物）的侵入，通常是给动物接种完整生物体或病原体亚基疫苗以在宿主体内诱发保护性免疫应答。由于抗原侵入产生的免疫应答往往可通过共同施用免疫势差剂或佐剂而增强。其中最好的是贮存型的佐剂（如完全弗罗因德氏（Freund）佐剂、不完全弗罗因德氏佐剂或Montanide）。这些佐剂能增强抗体应答，可将单独注射抗原达到的水平提高50到100倍。

虽然完全弗罗因德氏佐剂、不完全弗罗因德氏佐剂或Montanide能大大增强抗原的免疫应答，但它们还是存在一些缺点。当以注射方式使用抗原时，注射部位通常受到很大的损伤，这对于用于人体、爱畜或食用动物是不能令人满意的。而且，这些佐剂通过口服或肠内施用不能起到免疫势差剂的作用。

本发明涉及一类用化学方法或遗传学方法连接到免疫原或半抗原上能增强宿主对免疫原或半抗原免疫应答的分子，无论复合物是肠胃外施用、肠内施用或口服都有此效应。而且使用它们不会在注射部位产生很大的损伤。

有上述能力的分子可定义为具有膜蛋白普通性能的分子，这里所举的例子来自特殊类型的膜蛋白，更准确地说是来自革兰氏阴性细菌的外膜蛋白。具体例子包括TraT蛋白质，它是一种能抵抗菌株被血清杀死的某些大肠杆菌菌株的外膜蛋白。该类的其它蛋白质还有大肠杆菌外膜蛋白OmpA和OmpF。当一定量的TraT、OmpA或OmpF（以后称为载体）不用佐剂通过肌肉注射到小鼠体内时，所诱发的抗体反应可与用可溶蛋白如BSA、鞭毛或羊IgG与不完全弗罗因德氏佐剂混合注射所诱发的抗体反应相比。实际上，由外膜蛋白诱发的抗体反应非常高，即使加上不完全的弗罗因德氏佐剂的辅助也只有少许增加。

还发现，口服TraT或OmpA能显著刺激血清抗体抗TraT（1/4096）或抗OmpA（1/892）的滴度。

同样发现，适量供给（10⁹-10¹⁰）外膜中含有TraT的沙门氏菌（Salmonella）或大肠杆菌（E.coli）也可以加强抗TraT抗体的产生。

将半抗原（二硝基酚，DNP）、肽（CSP）或蛋白质（牛血清清蛋白，BSA）共价偶联到OmpA或TraT上，也能起到增强对DNP、CSP或BSA的免疫应答。

在第一个具体方案中，本发明提供了一种含有一个与载体分子偶联的免疫原的复合物，当把复合物施用给宿主时，无论是肠胃外施用、肠内施用还是口服，载体分子都能增强所述宿主对免疫原的免疫应答，其中所说的免疫原可以是抗原或半抗原，所说的载体分子包括原核或真核生物的膜结合蛋白质。

在较好的方案中，载体分子是革兰氏阴性菌的外膜蛋白。

较好的革兰氏阴性菌是大肠杆菌或沙门氏菌。

更可取的载体分子是大肠杆菌菌株产生的TraT蛋白或外膜蛋白质OmpA或OmpF。

本发明优先选用的免疫原包括CSP、来自轮转病毒的病毒衣壳蛋白VP7和全部或部分的真核生物蛋白质minactivin。

免疫原-载体复合物可以通过化学方法形成，其中包括结合作用，例如使用合适的结合剂或连接剂;以及载体和/或免疫原上功能团的修饰和/或反应。

因此，本发明提供了一种生产复合物的方法，该复合物含有一个偶联到载体分子上的免疫原，所说的载体分子来自原核或真核生物的膜结合蛋白质（imp），所说的免疫原包括抗原或半抗原，当把复合物施用给宿主时，无论是肠胃外施用、肠内施用或口服，其中的载体分子能增强宿主对免疫原的免疫应答，这个方法包括下述一个或几个步骤：

a）使免疫原与载体反应形成上述复合物;

b）化学修饰免疫原以提供至少一个能形成化学连接的功能基团，并使修饰后的免疫原和载体反应以形成上述复合物;

c）化学修饰载体以提供至少一个能形成化学连接的功能基团，并使免疫原和修饰后的载体反应以形成上述复合物;

d）化学修饰免疫原和载体以提供能形成化学连接的功能基团，并使修饰后的免疫原和修饰后的载体反应以形成上述复合物;

e）使免疫原与至少一种连接剂反应，并使连接后的免疫原与载体分子反应以形成上述复合物;