[其他]克隆限制修饰系统的方法

权利要求书

1、一种克隆限制修饰系统的方法，该方法包括修饰基因引入克隆载体使其在适当的宿主细胞内表达，将限制基因引入到含修饰基因的宿主细胞内。

2、根据权利要求1所述的方法，其中将修饰基因引入克隆载体并在适当宿主细胞中表达。具体步骤包括：

（a）从含有用作克隆的限制修饰系统的材料中提纯DNA，

（b）至少部分消化提纯的DNA使其形成DNA片段，

（c）连接DNA片段到克隆载体上，

（d）用步骤（c）的克隆载体转化宿主细胞以建立库，

（e）从库中筛选含有修饰基因的克隆，和

（f）培养含有步骤（e）中克隆的宿主细胞。

3、根据权利要求2所述的方法，其中在筛选后和培养前将限制基因引入宿主细胞。

4、根据权利要求2或3所述的方法，其中从含有限制修饰系统的细菌或病毒中选择DNA来源。

5、根据上述任一权利要求所述的方法，其中克隆的载体是质粒或病毒DNA分子。

6、根据权利要求5所述的方法，其中质粒为pBR322、pUC8、pUC9、pUC18、或pUC19。

7、根据上述任一权利要求所述的方法，其中将限制基因引入宿主细胞，包括将限制基因引入次级质粒，该质粒是与含修饰基因的质粒一致的，而后用次级质粒转化宿主细胞。

8、根据权利要求1到6中任一项所述的方法，其中将限制基因引入宿主细胞，包括将限制基因导入含有修饰基因的质粒。

9、根据上述任一权利要求所述的方法，其中宿主细胞所采用ER1467，K802、HB101、RR1、K803或MM294。

10、生产限制酶的方法，该方法包括如上述任一权利要求所述的克隆方法和从培养物中回收限制酶。

11、按照上述任一权利要求所述方法生产的克隆。

12、权利要求11所述的克隆，其中被克隆的系统包括DdeⅠ限制修饰系统。

13、根据权利要求11所述的克隆，其中被克隆的系统包括BamHⅠ限制性修饰系统。

14、被克隆的BamHⅠ核酸内切酶基因。

15、用权利要求14的克隆转化的宿主。

16、被克隆的DdeⅠ核酸内切酶基因。

17、用权利要求16的克隆转化的宿主。