[发明专利]非对映异构四氢吡啶并{2，3-d}嘧啶衍生物的制法

说明书

本发明涉及N-（4-〔2-（5，6，7，8-四氢吡啶并〔2，3-d〕嘧啶-6-基）-烷基〕-乙基〕-苯甲酰基）-L-谷氨酸的两个单独的非对映异体，其中每个异构体基本上不含有其他所有异体;本发明还涉及它们的制备方法及其作为抗肿瘤药物的作用。

叶酸抗代谢物，氨基蝶呤（白血宁）和氨甲蝶呤（也就是通常所说的10甲氨基蝶呤或氨甲蝶呤，methotrexate）都是抗肿瘤药物。这些化合物抑制包括叶酸的代谢衍生物在内的酶转化。例如氨甲蝶呤（ameth-opterin）抑制二氢叶酸还原酶，这是一种从二氢叶酸转化为四氢叶酸所必需的酶，而二氢叶酸是在胸苷酸合成酶作用下，把2-脱氧尿苷酸盐转化为胸苷酸盐过程中形成的。

叶酸氨基蝶呤的其它衍生物已被合成，并进行抗代谢物试验。在这些化合物的分子中，亚甲基或次甲基占据了通常分别由亚氨基或三价氮基占据的位置。这些衍生物具有不同程度的抗代谢活性。10-去氮（deaza）氨基蝶呤是高活性的（Sirotak等.，Cancer    Treat.Rep.，1978，62，1047），而5-去氮氨基蝶呤的活性和氨甲蝶呤相似（Taylor等，J.Org.Chem.，1983，48，4852）。据报导8，10-去氮氨基蝶呤也是有活性的（美国专利4460591号），5，8，10-三去氮氨基蝶呤则具有抗L1210小鼠白血病的活性（Yan等，J.Heterocycl.Chem，1979，16，541）。另一方面，10-去氮叶酸则未显示明显的活性（Struck等，J.Med.Chem，1971，14，693），5-去氮叶酸也只有轻微的细胞毒性作用。8，10-去氮叶酸只能勉强算作二氢叶酸还原酶抑制剂（De    Graw等.，“Chemistry    and    Biology    of    Pteridines”“蝶啶的化学与生物学”，Elsevier，1979，229），5，8，10-三去氮叶酸对L1210小鼠白血病也仅有不高的活性（Oatis等，J.Med.Chem.，1977，20，1393）。Taylor等已报导了5，10-二去氮氨基蝶呤、5，10-二去氮-5，6，7，8-四氢氨基蝶呤以及相应的5，10-二去氮叶酸衍生物（J.Med.Chem.，28∶7，914，1985）。

正如南非专利86/1235号所述，化合物N-（4-〔2-（2-氨基-4-羟基-5，6，7，8-四氢吡啶并〔2，3-d〕嘧啶-6-基）-乙基〕-苯甲酰基）-L-谷氨酸是一种广谱抗肿瘤药物。在此化合物中存在两个手性中心：在四氢吡啶并〔2，3-d〕嘧啶环的6位上的碳原子和谷氨酸基团中的α-碳原子。理论上此化合物可以有四种形式存在，但正如南非专利86/1235所述，此类化合物在开始偶联时使用的是L-谷氨酸，因而就减少了两种可能性。但这两种形式在其后的氢化期间同时产生，因而除去保护基后，得到所需产物是（S，S）和（R，S）的非对映异构体的混合物：

（S，S）：

（R，S）：

这些非对映异构体可以用物理法，如色层法加以分离，但由于这些化合物在大多数有机溶剂中溶解度低，因而使这种分离方法受到一定程度的阻碍，特别是在大规模生产中。这两种非对映异构体的混合物也可以用于治疗目的，二者都可作为有关叶酸酶的底物。但鉴于它们具有稍为不同的生物外形，所以更有利的是将它们相互分离最为理想，每一形式都基本上不含有另一形式，即每一形式的旋光纯度大于95%。

用一种实用的手性酸处理非对映异构体N-（4-〔2-（2-乙酰氨基-4-羟基-5，6，7，8-四氢吡啶并〔2，3-d〕嘧啶-6-基）-乙基〕-苯甲酰基）-L-谷氨酸二乙酯或其它带保护基衍生物的混合物溶液，于是生成盐。然后通过一步或多步分级结晶来分离所得到的非对映异构体的盐。此后通过用一种碱处理和除去保护基，使分离出的至少一种盐的阳离子部分的游离碱释放。盐的阳离子的释放，可以在除去保护基团之前或之后，以独立的步骤完成，或者，若这些基团在碱性条件下，易于脱除的话，也可以与除去保护基同时完成，即碱水解。

适宜的手性酸包括下述化合物的单个对映体。这些化合物有：10-樟脑磺酸、樟脑酸、α-溴樟脑酸、氧基乙酸、酒石酸、二乙酰酒石酸、苹果酸、吡咯烷酮-5-羧酸及其它。