[其他]生物反应修变剂的制备方法

说明书

本申请是1986年6月9日递交的美国专利872，131号申请的后续部分，且两者之间内容上並不是重迭的。

本发明总地涉及制备具有免疫调节性质之医药产品的方法，尤其是涉及制备生物反应修变剂（BRM）的方法，BRM定义为：以其所产生的治疗作用改变宿主对疾病的生物学反应並改变疾病与宿主之间关系的药剂。BRM可以分成两类：（1）可刺激或者改变一种或多种宿主抗性机制的生物学或化学药剂;（2）被证明可直接作用于特殊疾病的业经提纯的细胞产物。本发明属于第一类BRM，其包含能活化、增加或者改变宿主免疫学反应性的药剂，一般统称为免疫调节剂。

BRM可以单独使用，或者可与其它药剂结合使用，以提高对病原体的抵抗能力或由病原体的侵袭中得以恢复、改变或诱导对外来组织移植物的耐受性、提高肿瘤排斥或稳定作用並在经过其它治疗之后抑制肿瘤再发、恢复正常辅助细胞-抑制细胞机制，或者促进正常免疫反应。

自1900年以来，已发展了许多种免疫调节剂/免疫佐剂。这些药剂中大多数是微生物（细菌/真菌）来源的且最普通的是得自于棒状杆菌、分枝杆菌和诺卡氏菌属（CMN生物体）。各种免疫佐剂包括完整的存活细胞、死细菌、细胞壁、各种细胞壁碎片、内毒素，各种类型的多糖或亚细胞碎片如核糖核酸或核糖体。虽然所有这些制剂均已被证明在组织培养中、在动物和人体内对传染性和肿瘤性疾病具有免疫增强/调节/辅助活性，但由于它们在生产和组成上不一致而不易普遍使用且可能具有严重毒性。相对于治疗肿瘤形成而言，这些制剂在治疗已形成的疾病方面则不是很有用的。再者，也已证明这些制剂经反复使用会丧失活性（无细胞免疫反应性）、出现免疫偏向、超敏性反应、造成慢性炎症感染条件及/或其它多种不利条件。

由于这些制剂不纯和/或复杂性而不能够从化学上定义之，且在降低免疫反应和毒性并发症的尝试中，许多研究人员已由这些来源提取了种种特异部分，或者合成了多种已证明具有免疫学活性的组分。已研究过的特异部分的实例包括细胞壁部分脱壁酰基三肽、葡萄球菌蛋白A、各种多糖、RNA部分^（1）和核糖体部分^（2-5）。

就核糖体部分来说，其作用机理依据核糖体的来源而不同。虽然大多数核糖体疫苗需要有活性佐剂，但由金黄色葡萄球菌和脑膜炎双球菌（Neisseria meningitis）制得的核糖体则不需要。另外，由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）和伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium）制得的核糖体疫苗可诱导细胞介导的免疫反应，而由肺炎链球菌和酿脓链球菌（Streptococcus pyogenes）制得的核糖体疫苗则可介导体液免疫反应^（5）。虽然理论上可以认为已提取到的核糖体部分是活性制剂，但关于是否作为污染物存在的其它细胞成分（RNA、蛋白质、内毒素、细胞壁）引起了所观察的免疫反应性问题，在许多情况下仍有很多争议。

已知的细胞疫苗有时可能适于预防或治疗传染性疾病。然而，由于若干原因，它们並不适于作为治疗恶性肿瘤的非敏化的、一般通用的免疫调节剂使用。细胞壁、内毒素或不易降解成分的存在常常会引起相似于由整个生物体所致的毒性。再者，因为这类疫苗一般是得自于本身为宿主微生物系统之一部分或易于与宿主自身微生物系统产生交叉反应（共同抗原）的生物体，所以可引发无宜的免疫偏向（差）（immune    deviating）及复合免疫反应。这类疫苗还含有某些可能对于总的免疫强化活性有不太适宜之物理和化学性质的部分。

urban等人曾报导得自于特定细菌生物体的多核糖体具有抑制DBA/2小鼠皮肤SaD2纤维肉瘤发展的能力。多核糖体部分是通过改变渗透压或以机械方法（根据细菌类型而定）溶解细胞，之后经差速离心制得的。虽然对SaD2小鼠肿瘤的作用是阳性的，但尚不能根据这一资料确定所诱导之生物学反应的机理。虽然毒性很低，但Urban等人所述的方法可致使多核糖体分布图形（大小分布）有很大变异且产率很低，並且也没有达到质量、稳定性和效用的一致性。