[发明专利]淀粉酶的分离精制方法，所用的吸附剂及分离精制装置

说明书

本发明提出淀粉酶的分离精制方法及其所用的吸附剂和分离精制装置，特别是关于用交联多聚葡糖或交联均低聚物高选择性的吸附葡萄糖淀粉酶和β-淀粉酶的淀粉酶分离精制方法及装置。

现在，工业上是用α-淀粉酶、葡萄糖淀粉酶或β-淀粉酶对淀粉进行加水分解的方法生产葡萄糖、异构化糖和麦芽糖的。

这样，葡萄糖淀粉酶和β-淀粉酶对于从淀粉中生产有用的低分子性甜味料，则非常有用。

通常情况，酶是由生成酶的微生物、即酶的产生菌，经过液体培养制造的。作为研究用试剂的酶，是由盐析法和离子交换色谱电泳法相组合，通过复杂的分离精制过程，加以部分精制或高度精制而被应用。

与此对比，工业用的酶制剂，则是由培养滤液不经任何处理而加以浓缩的浓缩液或其干燥的粉末，或者经过分离精制之后所得到的浓缩液或其干燥粉末而制取。

但是，在培养滤液的浓缩液和粗干燥品中，由于含有培养液中所含有的多量令人讨厌的臭味成分和着色成分，所以在分离精制作为目的物的反应生成物时，最后必须要把这些成分除去。另外，在培养滤液中多半还都含有蛋白分解酶类。在除淀粉酶之外还含有蛋白分解酶类的培养滤液等的粗酶溶液中，于精制过程中及目的反应进行时，由于蛋白分解酶的作用，淀粉酶也常常被分解而失去活性，因此在利用淀粉酶等的酶反应生产有用物质时，就必须除去这些成为不利因素的不纯物质。这样，就给后续的反应生成物的分离精制工序增加了很大的负担。

应用一般性的精制方法，如已知的盐析法和液体色谱法，只能限于作到部分浓缩，要想提高分离的精度，就须要改变一些操作条件，例如沉淀剂的种类、浓度、pH、充填剂的种类、吸附剂及解吸剂的种类，须要经过把这些条件加以组合搭配的复杂过程。

不仅如此，操作中还须添加多量的作为沉淀剂或作为溶出剂的盐，而在进入到下一步工序时，还必须进行脱盐操作。此外，在这些个精制过程中还要产生盐浓度高达10%的BOD废液，这也须要进行处理，而且这一处理步骤相当复杂。

鉴于以上原因，由这些复杂工序所构成的人们所熟知的精制方法，自然就被局限于专门进行研究用的试剂等方面了。

尤其是对被认为难以精制的葡萄糖淀粉酶和β-淀粉酶，由于酶的起源不同，不同酶的分子构造也有所差异，尽管如此，如果开发出具有高选择性、高效性的吸附剂的话，便能够从培养滤液中将上述两种酶按同一等级进行高纯度的浓缩分离。

本发明者们，着眼于早已知晓的、以直链淀粉为吸附剂的吸附法作为α-淀粉酶的精制方法（直链淀粉-是葡萄糖的直链状聚合物，分子量10～40万，葡萄糖聚合数为5×10²～2×10³），并将这种方法试用于葡萄糖淀粉酶和β-淀粉酶的精制。

但是，与精制α-淀粉酶相比较，其吸附容量只有千分之一以下，非常之低，很显然，以淀粉作为吸附剂的这种众所周知的方法，对于葡萄糖淀粉酶和β-淀粉酶的精制是没有实用意义的。

本发明之目的是提供：从除葡萄糖淀粉酶和β-淀粉酶之外还含有多种多样不纯物的酶含有液中，对作为目的物的淀粉酶具有高选择性、高吸附性的吸附剂。

本发明之其它目的是提供：在和葡萄糖淀粉酶或β-淀粉酶的水溶液接触之后，就和这些淀粉酶形成复合体而变为不溶于水的凝胶，从而能非常容易地分离精制葡萄糖淀粉酶或β-淀粉酶的吸附剂。

本发明之再其它目的是提供：具有高选择性、能高效性吸附分离葡萄糖淀粉酶或β-淀粉酶的新规交联多聚葡萄糖和新规交联均低聚物。

本发明之再其它目的是提供：交联多聚葡糖及交联均低聚物的制造方法。

末发明之再其它目的是提供：从除葡萄糖淀粉酶和β-淀粉酶之外尚含有多种多样不纯物的酶含有液中，为了高选择性高效性的吸附分离目的淀粉酶而用交联多聚葡糖或交联均低聚物分离精制淀粉酶的方法。

本发明之再其它目的是提供：使对葡萄糖淀粉酶和β-淀粉酶两者之一或两者进行选择性吸附的新规吸附剂和酶含有液相接触，根据目的的不同，吸附分离两种酶中的一种或两者的淀粉酶的分离精制方法。

本发明之再其它目的提供：使吸附剂吸附的葡萄糖淀粉酶及β-淀粉酶容易解吸的方法。

本发明之再其它目的是提供：具有高选择性高效性地吸附分离葡萄糖淀粉酶及β-淀粉酶的淀粉酶分离精制装置。

本发明的再其它目的和优点：阅读以下记载便可明了。

本发明的第一方面是：通过使具有分支链的多聚葡糖的分子间和/或分子内交联化，得到三维交联高分子物质（交联多聚葡糖）。