[其他]捕获靶子及本底的方法及亲和性测定的装置

说明书

本发明涉及用于捕获靶分子的方法、试剂、组合物、药盒及设备。具体地说，本发明涉及从临床样品中捕获脱氧核糖核酸（DNA）或核糖核酸（RNA）的方法、试剂、组合物和药盒。本发明的实施方案提供了在临床样品中迅速而灵敏地检测核酸靶子的方法，这些方法适用于非放射性标记技术和自动化。

为了易于理解本发明，现给出下列定义。本申请中所用术语“生物结合对”是指任一对具有自然亲和性或结合能力的分子。为了本申请的目的，术语“配体”是指生物结合对中的一个分子，术语“抗配体”或“受体”是指生物结合对中的对立分子。例如（并非限制），本发明的实施方案可用于核酸杂交检测，此处的生物结合对包括两条多聚核酸的互补链。一条链称为配体，另一条链则称为抗配体。但是，生物结合对可以包括抗原与抗体、药物与药物受体位点、酶与酶的底物。

术语“探针”是指能够选择性地与抗配体靶子结合的性质已知的配体。对于核酸，术语“探针”是指一条碱基序列与靶链互补的核酸链。

术语“标记物”是指能够检测的半分子，包括（举例而非限制）放射性同位素、酶、发光剂和染料等。所用术语“试剂”是广义的，它包括任何参与产生可测应答的反应的半分子。所用术语“辅因子”是广义的，包括任何参与与试剂反应的半分子。

所用术语“可回收的”是广义的，用它来描述这样一种实体：它基本能够分散于基质中，并能通过固定、过滤、分配及类似方法从该基质中去掉或分离。

术语“载体”单独使用时包括常规载体如滤器和膜以及可回收的载体。

提及配体和抗配体的结合时，术语“可逆的”是指在不永久改变配体和抗配体的基本化学性质的变化下，二者能够结合或释放。例如（并非限制），可逆结合包括由pH、温度和离子强度的改变而控制的结合和释放，这些变化不会破坏配体和抗配体。活细胞中的遗传信息储存于线状DNA分子中。在活体中，DNA分子为双螺旋，其中每条是一条核苷酸链。每个核苷酸的特征在于下列四个碱基中的一个：腺嘌呤（A）、鸟嘌呤（G）、胸腺嘧啶（T）和胞嘧啶（C）。碱基在这样的意义上互补，即由于功能基团的定向，某些碱基对相互吸引并通过氢键键合在一起。一条DNA链中的腺嘌呤与对立的互补链中的胸腺嘧啶配对。一条DNA链上的鸟嘌呤与对立互补链中的胞嘧啶配对。在RNA中，胸腺嘧啶碱基由脲嘧啶代替，脲嘧啶与对立互补链中的腺嘌呤配对。

DNA由共价连接的脱氧核糖核苷酸组成，RNA由共价连接的核糖核苷酸组成。活生物体的遗传密码载于DNA链的碱基对序列中。

每个核酸通过一个核苷酸上的糖的5′羟基和相邻核苷酸上的糖的3′羟基间的磷酸二酯桥连接。每条天然存在的线性DNA或RNA链有一个具有5′游离羟基的末端和另一个具有3′游离羟基的末端。多核苷酸末端通常参照各自的游离羟基称为5′末端或3′末端。DNA和RNA的互补链形成反平行的复合物，其中一条链的3′末端与对立链的5′末端定向结合。

核酸杂交检测法的基础是，两条核酸链在互补区有配对的趋向。目前，核酸杂交检测法主要用于在完整DNA分子中、在核酸混合物中或在核酸片段的混合物中检测和鉴别独特的DNA或RNA碱基序列或专一性基因。

在组织或培养物样品的全DNA或RNA提取物中，特殊DNA或RNA序列或专一性基因的鉴别可以表明所存在的生理或病理状况。具体地说，在人或动物组织的全DNA或RNA提取物中，特殊DNA或RNA序列或专一性基因的鉴别可以表明遗传疾病的存在，或表明镰形细胞贫血症、组织相容性、癌和癌前期状态、细菌或病毒感染等状况的存在。在细菌培养物或含有细菌的组织的全DNA或RNA提取物中，特殊DNA或RNA序列或专一性基因的鉴别可以表明抗生素抗性、毒素、病毒或质粒的存在，或有助于分辨不同的细菌型。

因此，核酸杂交检测法在疾病诊断和检测中具有巨大潜力。进一步的潜力存在于农业和食品加工中，在这些领域中，核酸杂交检测法可以用来检测植物致病机理或产生毒素的细菌。

使用最为广泛的核酸杂交检测法之一称为Southern吸印滤膜杂交法，或简称为Southern法（Southern，E.，J.Mol.Biol.I，98，503，1975）。Southern法用于鉴别靶DNA或RNA序列。此方法通常通过在硝酸纤维素片上固定RNA或DNA样品进行。固定的RNA或DNA样品与放射性标记的DNA链探针接触，该探针具有互补于靶序列的碱基序列并携有可检测的放射性标记。使探针和DNA样品之间发生杂交。