[其他]采用杂交测定人体T细胞白血病病毒I和II

权利要求书

1、一种测定或检验核酸顺序是否存在的方法，所述核酸顺序大量存在于HTLVⅠ或HTLVⅡ核酸，或HTLVⅠ和HTLVⅡ两者的核酸分离体之中，特别适于HTLVⅠ或HTLVⅡ或HTLVⅠ和HTLVⅡ两者分离体中的核酸，其核酸顺序被怀疑是包含在样品中，其特征在于该方法包括：

a、用核酸顺序的每一链的寡核苷酸引物、四种不同的核苷三磷酸、一种聚合作用剂在杂交的条件下，一起或分别处理样品，对于每一核酸顺序链，每一引物的延长产物被合成，它与要测定或检验的核酸顺序的每一链互补，这样，一种引物合成的延长产物，当延长产物从它的补体中分离出来时，可作为合成其他引物的延长产物的模板；

(b)、在变性条件下处理样品以将引物延长产物从它们的模板中分离出来，如果待测的顺序是存在的；

(c)、用寡核苷酸引物处理步骤(b)中的产物，将步骤(b)中所产生的每一条单链作为模板合成引物延长产物，结果扩增了要测定的顺序，如果它是存在的话；和

(d)、确定要测的顺序是否存在于样品之中。

2、如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（d）包括如下几步：

（1）向步骤（c）的产物加入一个可与扩增的核酸顺序杂交的标记探针;和

（2）确定探针是否已经与核酸样品中的扩增的顺序杂交。

3、如权利要求1或2所述的方法，其特征在于步骤（b）和（c）至少重复一次，而且引物是从HTLVⅠ和HTLVⅡ基因组中的X区中选出的。

4、如权利要求1～3的任一权利要求所述的方法，其特征在于所述的聚合作用剂是从下列酶中选出的一种酶：大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ、大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的Klenow片断，反转录酶、或一种在暴露到足够使核酸变性的温度下仍保持其酶活性以在步骤（a）和（c）的反应温度下，形成所述的延长产物的酶。

5、如权利要求1～4中任一权利要求所述的方法，其特征在于在步骤（a）之前，样品用可使样品中所含有的核酸链裸露的试剂处理，所述链可同时或随后分离。

6、如权利要求2所述的方法，其特征在于步骤（2）包括下列几步：

（1）用对探针顺序内某一位置有识别的限制性内切酶消化步骤（d）中的杂交了的混合物;和

（2）确定限制消化物中是否含有与待测定的HTLVⅠ和HTLVⅡ顺序或HTLVⅠ或HTLVⅡ顺序存在有关的限制片断。

7、如权利要求6所述的方法，其特征在于步骤（1）和（2）使用了一种含有一个或一个以上具HTLVⅠ和HTLVⅡ病毒基因组或HTLVⅠ或HTLVⅡ病毒基因组的顺序的核酸的正控制和/或不含有任何具从HTLVⅠ和HTLVⅡ病毒或HTLVⅠ或HTLVⅡ病毒中得到的核酸的负控制。

8、一种含有扩增核酸顺序的组成，所述顺序大量存在于HTLVⅠ或HTLVⅡ核酸分离体或HTLVⅠ或HTLVⅡ两者的核酸分离体中，特别是HTLVⅠ或HTLVⅡ或HTLVⅠ和HTLVⅡ两者的分离体中的核酸，其特征在于，该组成是这样产生的：

（a）、用核酸顺序每条链的寡核苷酸先导物、四种不同的核苷三磷酸和一种聚合作用剂在杂交条件下，一起或分别处理含有所述核酸顺序的非扩增形式的样品，对每一核酸顺序，每一引物的延长产物被合成，延长产物基本上是与所要测定或检验的核酸顺序的每一链互补，这样，从一个引物合成的延长产物，当延长产物从它的补体上分离出来时，可以作为合成其他引物延长产物的模板;

（b）、将引物延长产物从模板分离出来，在模板上，延长产物被合成以产生单链分子;和

（c）、用寡核苷酸引物处理步骤（b）中的产物，这样，用步骤（b）中所产生的每一条单链作为模板合成引物延长产物，结果导致了核酸顺序的扩增。

9、一种测定和检验核酸顺序是否存在的装置，所述核酸顺序大量存在于HTLVⅠ或HTLVⅡ核酸或HTLVⅠ和HTLVⅡ两者核酸的分离体中，特别适于HTLVⅠ或HTLVⅡ或HTLVⅠ和HTLVⅡ两者的分离体中的核酸，核酸顺序被怀疑包含在样品中，其特征在于该装置包括：

（a）、一种用于要检测的核酸顺序的每链的寡核苷酸引物，它的一种或多种引物基本上与每条特定核酸顺序的每条链互补，这样，从一个引物合成的一种延长产物，当延长产物从它的补体中分离出来时，可以作为合成其它引物延长产物的模板;和

（b）、一种能与核酸顺序杂交的标记探针。

10、如权利要求9所述的装置，其特征在于它进一步包括一种聚合作用剂，四种不同的核苷三磷酸中的一种和测定所述探针和所述顺序杂交物的手段。