[其他]产生除虫菌素B及其培养物的方法

说明书

本发明涉及缺乏除虫菌素B转0-甲基酶活性和侧链2-氧代酸脱氢酶活性的除虫链霉菌（Streptomyces    avermitilis），产生该除虫链霉菌的方法，以及用除虫链霉菌产生天然的和非天然的除虫菌素B。

美国专利4，310，519和4，429，042描述了除虫菌素，这是一种具有强抗寄生虫活性的有关制剂的复合物;还描述了用除虫链霉菌菌株通气发酵产生除虫菌素的方法;这些菌株即除虫链霉菌ATCC    31267，31271，31272。所列举的后两个菌株分别代表得自除虫链霉菌ATCC31267经紫外辐射获得的培养物的冷冻瓶和冻干管。

1987年3月18日公布的EP241，731（1986年7月16日申请的美国专利申请系列NO.886，867的复本）公开了许多化合物（本文中称为非天然除虫菌素），它们与天然的或已知的除虫菌素有关，但在25位上有一个新的取代基;还公开了在某种特定的羧酸或其衍生物或前体存在下，利用除虫菌素的产生菌通过发酵制备除虫菌素的方法。用以产生上述新的C-25取代的除虫菌素的除虫链霉菌是除虫链霉菌ATCC31267、31271和NCIB12121。最后一种菌株得自除虫链霉菌ATCC31271，描述于EP214，731。将其培养在半合成培养基中时，可以增加新的C-25取代除虫菌素的产量。ATCC31267、31271、31272和NCIB12121除产生新的C-25取代的衍生物以外，各自还可以产生不同量的已知的或天然的除虫菌素，其中的25位取代基是异丙基或（S）仲丁基（1-甲基丙基）。

除虫菌素（下面所画出的结构式（Ⅰ））的碳骨架来自乙酸盐和丙酸盐，而天然除虫菌素的C-25取代基则来自L-异亮氨酸（R＝（S）-仲丁基）或L-缬氨酸（R＝异丙基）〔Fisher    and    Mrozik，“Macrolide    Antibiotics”，Academic    Press（1984），第14章〕。

“已知”或“天然”除虫菌素是指那些由除虫链霉菌ATCC    31267、ATCC    31271和ATCC    31272产生的除虫菌素，其中25位取代基是异丙基或（S）-仲丁基（1-甲基丙基）。那些25位取代基不是异丙基或仲丁基（S型）的除虫菌素在本文中称为新的或非天然的除虫菌素。

上述美国专利所列举的除虫链霉菌菌株产生一类在该专利中被描述为C-076的物质。这类物质包括八个不同的但紧密相关的化合物，描述为C-076    A1a、A1b、A2a、A2b、B1a、B1b、B2a和B2b。“a”系列化合物指25位取代基是（S）-仲丁基的天然除虫菌素，“b”系列指那些25位取代基是异丙基的除虫菌素。“A”和“B”标号则分别指5位取代基是甲氧基或羟基的除虫菌素。最后，数字“1”指22-23位上有一个双键的除虫菌素;数字“2”指22位有一个氢、23位上有一个羟基的除虫菌素。

在本申请中对于非天然的除虫菌素的25位取代基没有采用这种识别标号。标号A1、A2、B1和B2仍指与上述天然除虫菌素的结构特点相对应的非天然除虫菌素。

已在枯草杆菌（Bacillus    subtilis）（Willecks    and    Pardee，J.Biol.Chem.246，5264-72（1971））和恶臭假单胞菌（Pseudomonas    Putida）（Martin    et    al.，J.Bac-teriology，115，198-204（1973））中报导过缺乏侧链2-氧代酸脱氢酶活性的突变株，但在链霉菌（Streptomyces）中没有报导。

Schulman    et    al.J.Antibiot.38（11），1494-1498（1985）报导了除虫链霉菌Agly-1，这是一种实质上只产生除虫菌素糖苷配基A1a和A2a的突变株。也报导了除虫链霉菌Agly-1在无真菌素（Sinefungin）（它使除虫菌素糖苷配基B组分的产量增加）存在下的发酵。同样，一种除虫菌素的高产菌株除虫链霉菌08在无真菌素（作为转0-甲基酶的抑制剂）存在下发酵时，导致产生在糖苷配基的5位碳上和齐墩果糖的双糖部分中缺乏0-甲基的除虫菌素。