[其他]与结合蛋白相融合的蛋白质的生产及纯化

权利要求书

1、一种生产和纯化蛋白质分子的方法，包括：

(a)构建在转化的宿主细胞中表达杂交多肽的DNA表达载体，该杂交多肽包括蛋白质分子和对一种底物具有专一亲和性的结合蛋白或其部分；

(b)将表达载体导入合适的宿主细胞中并使杂交多肽表达；

(c)使转化细胞产生的杂交多肽和结合蛋白能与之结合的底物接触；

(d)回收蛋白质分子。

2、权利要求1的方法，其中编码杂交多肽的DNA含有一个连接DNA片段，它将编码蛋白质分子的DNA和编码结合蛋白的DNA连在一起。

3、权利要求1或2的方法，其中的底物是交联的直链淀粉。

4、前述权利要求中任何一项的方法，进一步包括从底物上释放杂交多肽的步骤，即使结合的杂交多肽与一种取代杂交多肽的物质相接触。

5、前述权利要求中任何一项的方法，进一步包括从杂交多肽上切下蛋白质分子的步骤。

6、一种用于构建表达载体的融合载体，该表达载体表达一种与待纯化的蛋白质分子融合的结合蛋白，包括：

（a）一个编码结合蛋白或其具有生物活性的部分的DNA片段，该结合蛋白与一种底物具有专一亲和性;

（b）一个编码连接顺序的DNA片段，它将编码结合蛋白的DNA和编码蛋白质分子的DNA连在一起。

7、权利要求6的融合载体，它含有质粒pCG150。

8、一种用于生产纯化的蛋白质分子的DNA表达载体，它在表达时产生与蛋白质分子相融合的结合蛋白，包括：

（a）一个编码结合蛋白或其部分的DNA片段，该结合蛋白对于一种底物具有专一亲和性;

（b）一个编码待纯化的蛋白质分子的DNA片段。

9、权利要求1至5中任何一项的方法或权利要求6至8中任何一项的载体，其中的结合蛋白是糖结合蛋白、受体蛋白、氨基酸结合蛋白、硫酸盐结合蛋白、维生素结合蛋白、金属结合蛋白、磷酸盐结合蛋白、外源凝集素结合蛋白或核酸结合蛋白中的任意一种。

10、权利要求9的方法或载体，其中的糖结合蛋白是麦芽糖结合蛋白。

11、权利要求8的载体，其中编码连接顺序的DNA片段插在编码结合蛋白的DNA和编码蛋白质分子的DNA之间。

12、权利要求6或11任一个的载体，其中的连接顺序包括一个或多个限制位点。

13、权利要求6或11任一个的载体，其中的连接顺序编码的多肽由一种蛋白水解剂识别和切割。

14、权利要求6或11任一个的载体，其中的连接顺序编码一种间隔多肽，它将结合蛋白与由表达载体表达的蛋白质分子分离开来。

15、一种生物反应器，包括：

（a）一种杂交多肽，包括一种可与一种物质相互作用产生所需结果的蛋白质分子，和一种对一种底物具有专一亲和性的结合蛋白或其部分;

（b）底物，其中杂交多肽中的结合蛋白成分与此底物结合。

16、一种制备生物反应器的方法，包括：

（a）构建一种在转化的宿主细胞中表达杂交多肽的DNA表达载体，该杂交多肽包括一种与一种物质相互作用而产生所需结果的蛋白质分子和一种对一种底物具有专一亲和性的结合蛋白或其部分;

（b）将表达载体导入合适的宿主细胞中并表达杂交多肽;

（c）使转化细胞产生的杂交多肽和结合蛋白与之结合的底物接触。

17、一种使一种物质和一种与之相互作用的蛋白质分子反应而产生所需结果的方法，包括：

（a）使含有蛋白质分子和一种对底物具有专一亲和性的结合蛋白或其部分的杂交多肽结合在底物上;

（b）使该物质与结合的杂交多肽接触。

18、权利要求1、15、16和17中任何一项的方法，其中的底物包含在亲和层析柱中。