[发明专利]全血样品分析试剂系统及化学处理方法

说明书

本发明涉及一种快速进行全血中的红细胞部分的溶血作用的新溶解剂系统，借助此种系统可将白细胞部分以其天然状态或接近天然状态的形式分离出来。然后可将该白细胞部分在多种不同的环境中进行进一步研究或分析。本发明的溶解剂实际上由一种水溶性化合物组成，此种水溶性化合物在水介质中至少部分离解，从而释放出质子和平衡离子。在将相应浓度的此种化合物加入全血样品中时，其离解的程度可有效地将血样酸化（PH值约在2.6至4.0范围内），并同时将血样的重量克分子渗透压浓度保持在低于大约100毫渗克分子。本溶解剂系统的优选用途之一是预处理全血样品，来进行红细胞部分的快速和实际上是完全的溶血作用。此种预处理还导致微妙地改变白细胞部分，从而，使白细胞部分进一步分离为至少五种独特的亚种群，因此，本试剂系统适用于配制用聚焦流式分析系统，例如VCS全血分析仪和Epics    Model    C和PROFILE流式细胞光度计（均由美国佛罗里达州海厄利亚conlter电子仪器有限公司出售），进行分析的全血样品。

在研究和分析复合生物流体（即全血）的组分之前，通常需要将其分离成为其各种组分，这也往往是在此种研究和分析中所采用的许多确认的分析方案和/或测试仪器的必要的技术要求。在血样中的流体部分的此种研究或分析是最使人关注的场合，可将细胞部分从血样中分离出去，而不必考虑细胞的生存或细胞膜的完整性。相反，在血样中的细胞部分的此种研究或分析是最使研究人员或临床医生关注的场合时，将全 血样品分离成为各种细胞组分，就需要相应地调节血样的处理/加工技术。将全血样品分离成为其各种细胞组分的常规方法是用离心的方法。虽然此种方法是有效的，但是需要花很大的劳动、效率相当低而且需要用人工来控制血样中的细胞部分。

在试图用化学药剂来进行血样中的细胞部分的此种分离时，由于种种原因，结果始终是不能令人完全满意的。更准确地说，细胞种群在活体内或体外的生活强度和生存性，均取决于保持一种与保存实际细胞结构和细胞中的化学平衡一致的准确生理环境。细胞膜的渗透性和运送特性可控制细胞中的化学平衡。生理环境的改变又可以诱发细胞膜的应答或改变。细胞膜应答在性质上是“防御性的”;也就是说，细胞膜的生理应答是适合于保持细胞中的化学平衡，因此是延续和不间断细胞的生存性。

现在已充分认识到，细胞只能在一定的限度范围内耐受此种理想生理环境的改变;而且，还认识到如果超过此种限度，细胞就会遭到永久性的损伤。在本技术领域中还进一步认识到，此种生理环境的改变（即，稀释介质的毒性-即使是用蒸馏水）可影响细胞的溶血作用。

已经广泛地研究了全血中的各种细胞种群对其生理环境的改变的耐受程度并利用了大量的文献资料来证明。改变全血中的细胞部分的生理环境的各个方面的效果是微妙的和引人注目的，而且可以通过饮食代谢物和/或异物来实现。这些研究工作包括Da    costa等人在Transfusion杂志，13，305（1973年）中所发表的检测细胞制剂对不同药物的反应;Kobayoashi.T等人在Journal    of    BioChemistry，93，675（1983年）中所发表的检测细胞制剂对欲食不平衡的反应;和Rother.T等人在Z.Immunologie    Forschungsgemeinschaft，155，118（1978年）中和Schettini.F等人在Acta    Paediat.scand.，60，17（1971年）中所发表的检测细胞制剂对改变PH值的反应。

在上述每一篇文章中，药物、食物代谢物或改变PH值均显著地将血液的生理环境改变到可使红白细胞发生溶血作用的程度。

更准确地说，上述Rother等人的文章，报导了可通过应用在有EDTA存在的情况下可溶解未致敏的红血细胞的盐酸来酸化（PH值为6.4）从而使血清活化。这篇文章将上述这种酸化作用的效果与用腠岛素使血清活化后所观察到的“偏差溶解”活性进行了比较。SChettini和他的同事们进行了一项独立的、与Rother等人的研究没有联系的研究工作，他们得出结论认为，婴儿和年纪较小的儿童的红细胞对酸的溶血作用比年纪较大的儿童更敏感。