[发明专利]酸性脲酶及其生产

说明书

本发明系一种新的脲酶，它可用于提高酒精性饮料的质量或用于临床实验室检验或食品中的脲的测定。

脲酶(E，C，3，5，1，5)是一种分解脲为氨气和二氧化碳的酶，广泛布于自然界的植物，动物和微生物体内。除了来自刀豆素A(Cananal ia  Adans(Jack豆))和鼠疫杆菌(Bacillus pastenri)的脲酶已被商品化生产和提供使用以外，已知还有由某些微生物合成的分子量440,000的脲酶，包括：百合棒状杆菌(Corynebactiriumlilium)，产氨短杆菌(Brevibacteriumammoniagenes)，石蜡节杆菌(Arthrobacterparaffineus)，普通变形杆菌(proteus vulgaris)，嗜氨微杆菌(Microbacterium ammoniaphilum)或支气管败血杆菌(Bordetella bronchiseptica)(日本专利公布№60-55119)，还有由芽胞杆菌UR-155(Bacillus SP，UR-155)合成的分子量440,000的脲酶(日本未审查专利公布(KOKAI)59-17987)以及由绿脓假单孢杆菌(Pseudomonas aeruginosa)和红色奴卡氏菌(Nocardia erythrropolis)(日本未审查专利申请(KOKAl)61-257183)合成的分子量280,000的脲酶。

上述全部脲酶最适反应PH值均于中性到碱性区，在酸性区不但不稳定和易于失活，而且难以进行反应。特别是当反应温度高于室温或反应系统中含有有机溶剂，如酒精时，这些脲酶显示出大量失活的缺点。

本发明者作了大量的筛选性研究以发现能产生最适PH为酸性区并且高度稳定的脲酶的微生物，发现属于乳杆菌属(Lactobac-illus)和链球菌属(Streprotoccus)的一个菌株，其细胞内积累所需要的脲酶。随后，发明者对该酶进行分离和纯化，及进一步研究，并完成本发明。

因此，本发明目的标是提供一种具有下列理化特征和最适PH于酸性区的新的脲酶(简称酸性脲酶)：

(1)作用

它使1摩尔脲和1摩尔水产生2摩尔氨气和1摩尔二氧化碳。

(2)底物特异性

它主要是有效地作用于脲。

(3)最适PH和PH稳定性

它的最适PH是1.5-5.5，在PH6-8.37℃下稳

定30分钟。

(4)最适温度和温度稳定性

在最适PH下，它是最适温度是55-75℃，在PH6，

50℃下保持稳定30分钟。

(5)抑制剂

它可被氯化汞和乙酰氧肟酸抑制。

(6)分子量

经凝胶过滤确定其分子量为100,000到250,000。

(7)比活性

在最适PH和37℃下，它的比活性不低于20单位/毫克蛋白质。

本发明的另一个目标是提出一种通过在培养基中培养乳菌属或链球菌属的一种细菌来生产酸性脲酶的方法。在生产本发明的酸性脲酶中使用的乳杆菌属或链球菌属产脲酶菌株，包括发酵乳杆菌(Laotobac-illusfe rmentum)JCM5867(IFO14511，FERMP-8990)，发酵乳杆菌JCM5868(IFO14512，FERM P-8991)，发酵乳杆菌JCM5869(IFO14513，FERM P-8992)，reuteri乳杆菌(Lactobacillusreuteri)UM-12(IFO14629，FERM P-9456)，reuteri乳杆菌UM-18(IFO14630，FERM P-9457)，reuteri乳杆菌Rt-5(IFO 14631，FERMP-9458)，ruminis乳杆菌(Lactobacillusruminis)PG-98(IFO14632，FERM P-9459)，轻型链球菌(Streptococus mitior)PG-154(IFO14633，FEM P-9460)，牛链球菌(Streptococcus boyis)PG-186(IFO14634，FERM P-9461)和唾液腺链球菌(Streptococcus sulivarius)PG-186(IFO 14746)可以作为例子来说明．上述的IFO编号系日本大阪发酵研究所保藏菌种编号(地址Juso-honmachi