[发明专利]用组培获得100％不育群体的白菜制种技术

权利要求书

1、一种利用组织培养获得白菜100%不育群体生产一代杂种种子的方法，包括采取适期移栽，合理密植，适宜行比，其特征在于：

(1)取白菜不育株的种子或侧芽，经表面消毒，在无菌条件下接种在88-13或88-52或C.C-1或C.C-1A基本培养基中，该培养基另加6BA(或KT)3.0-5.0mg/L，NAA(或IAA)0.1-0.5mg/L，活性炭0.15-0.50%，培养5-15天后生长成幼苗；

(2)在无菌条件下，将幼苗顶芽切下，接种在88-13或88-52或C.C-1或C.C-1A基本培养基中，该培养基另加6BA(或KT)2.0-4.0mg/L，NAA(或IAA)0.1-1.0mg/L，诱导产生不定芽，当不定芽长至2-3厘米高时，将不定芽切下转到上述相同培养基中进行继代培养，一般每隔10-20天继代一次；

(3)在无菌条件下，将长至2-3厘米高的不定芽转到88-13或88-52或C.C-1A或C.C-1基本培养基中进行生根培养，该培养基另加6BA(或KT)1.0-4.0mg/L，NAA(或IAA)0.5-1.0mg/L，活性炭0.15-0.50%，培养20天后，形成具根可移栽的试管苗；

(4)将试管苗移栽到装有营养土的培养钵内，经过栽培管理，形成正常开花的不育群体；

(5)试管苗培养条件为：温度白天为18-24℃，夜间为10-15℃，光照为1000-2000勒克司，每天光照10小时；

(6)88-13、88-52、CC-1A和CC-1培养基如下：

C.C-1A培养基成分为：

化合物           毫克/升

NH₄NO₃1500-1800mg/L

(或NH₄SO₃) 120-500mg/L

CaCl₂·2H₂O 150-650mg/L

MgSO₄·7H₂O 250-450mg/L

KNO₃300-2500mg/L

KH₂PO₄150-400mg/L

(或Na₂PO₄) 120-175mg/L

ZnSO₄·7H₂O 4-15mg/L

H₃BO₃3.8-15mg/L

MnSO₄·4H₂O 10-35mg/L

CuSO₄·5H₂O 0.01-0.04mg/L

Na₂MoO₄·2H₂O 0.1-0.35mg/L

KI                0.5-0.9mg/L

CoCl              0.01-0.04mg/L

C₁₀H₁₄N₂O₉Na₂·2H₂O 6.50-7.95g/L

FeSO₄·7H₂O 5.10-5.95g/L

盐酸噻胺           0.2-0.7mg/L

盐酸吡哆索         0.2-0.75mg/L

叶酸               0.25-0.80mg/L

肌醇               80-125mg/L

烟酸               2.0-7.0mg/L

甘氨酸             0.50-4.00mg/L

生物素             0.02-0.09mg/L

蔗糖(或葡萄糖)      3%

琼脂                0.4-0.8%

pH                  5.8

其中：C₁₀H₁₄N₂O₈Na₂·2H₂O6.50-7.95g/L、FeSO₄·7H₂O5.10-5.95g/L分别溶解，定溶于1升水，每升培养基取此母液5毫升。

88-13培养基为：

化合物           毫克/升

NH₄NO₃1650mg/L

CaCl₂·2H₂O 440mg/L

MgSO₄·7H₂O 370mg/L

KNO₃1900mg/L

KH₂PO₄170mg/L

ZnSO₄·7H₂O 10mg/L

H₃BO₂10mg/L

MnSO₄·4H₂O 25mg/L

CuSO₄·5H₂O 0.025mg/L

Na₂MoO₄·2H₂O 0.25mg/L

C₁₀H₁₄N₂O₈Na₂·2H₂O 7.45g/L

FeSO₄·7H₂O 5.57g/L

盐酸噻胺           0.5mg/L

盐酸吡哆索         0.5mg/L

叶酸               0.5mg/L

肌醇               100mg/L

烟酸               5mg/L

甘氨酸             2mg/L

生物素             0.05mg/L

蔗糖               3%

琼脂               0.8%

pH                 5.8

其中：C₁₀H₁₄N₂O₈Na₂·2H₂O7.45g/L、FeSO₄·7H₂O5.57g/L分别溶解，定溶于1升水，每升培养基取此母液5毫升

88-52培养基成分：

化合物           毫克/升

NH₄NO₃1650mg/L

CaCl₂·2H₂O 440mg/L

MgSO₄·7H₂O 370mg/L

KNO₃1900mg/L

KH₂PO₄170mg/L

ZnSO₄·7H₂O 8.6mg/L

H₃BO₂6.2mg/L

MnSO₄·4H₂O 22.3mg/L

KI               0.083mg/L

CoCl₂·6H₂O 0.025mg/L

CuSO₄·5H₂O 0.025mg/L

Na₂MoO₄·2H₂O 0.25mg/L

C₁₀H₁₄N₂O₈Na₂·2H₂O 7.45g/L

FeSO₄·7H₂O 5.57g/L

盐酸硫胺素         0.4mg/L

盐酸吡哆索         0.5mg/L

烟酸               0.5mg/L

肌醇               100mg/L

甘氨酸             2mg/L

蔗糖               3%

琼脂               0.8%

pH                 5.8

其中：C₁₀H₁₄N₂O₆Na₂·2H₂O7.45g/L、FeSO₄·7H₂O5.57g/L分别溶解，定溶于1升水，每升培养基取此母液5毫升C.C-1培养基成分为：

化合物           毫克/升

NH₄NO₃450mg/L

CaCl₂·2H₂O 600mg/L

MgSO₄·7H₂O 250mg/L

KNO₃300mg/L

KH₂PO₄300mg/L

ZnSO₄·7H₂O 10mg/L

H₃BO₃10mg/L

MnSO₄·4H₂O 25mg/L

CuSO₄·5H₂O 0.025mg/L

Na₂MoO₄·2H₂O 0.25mg/L

C₁₀H₁₄N₂O₈Na₂·2H₂O 7.45g/L

FeSO₄·7H₂O 5.57g/L

盐酸噻胺           0.5mg/L

盐酸吡哆索         0.5mg/L

叶酸               0.5mg/L

肌醇               100mg/L

烟酸               5mg/L

甘氨酸             2mg/L

生物素             0.05mg/L

蔗糖               3%

琼脂               0.8%

pH                 5.8

其中：C₁₀H₁₄N₂O₆Na₂·2H₂O7.45g/L、FeSO₄·7H₂O5.57g/L分别溶解，定溶于1升水，每升培养基取此母液5毫升