[发明专利]类固醇生物化学氧化的方法和用于此方法中的遗传工程方法产生的细胞

权利要求书

1、一种在重组宿主中操作的表达基因盒，包括：

一个编码了一种蛋白的异源DNA编码序列，该蛋白能单独地或与一个或多个另外的蛋白共同合作、在胆甾醇转化为氢化可的松的生物学途径中具有催化氧化作用步骤的功能，这个步骤选自于由以下组成的组：

胆甾醇转化成孕甾烯醇酮；

孕甾烯醇酮转化成孕酮；

孕酮转化成17α-羟基孕酮；

17α-羟基孕酮转化成11－脱氧皮甾醇；和

11-脱氧皮甾醇转化成氢化可的松。

以及在所述宿主中起作用的相应的控制序列。

2、根据权利要求1的一种表达基因盒，其特征在于其中的异源DNA编码序列编码了至少两种蛋白质，这两种蛋白质单独地或与一种或多种蛋白质合作、具有催化权利要求1组中的至少两个氧化步骤的功能。

3、根据权利要求1的表达基因盒，其特征在于它至少含有一个另外的异源DNA，该DNA具有它自己的起作用的控制序列，编码了一种蛋白质，能单独地或与一个或多个另外蛋白质共同合作、具有催化权利要求1组中的一个氧化步骤的功能。

4、根据权利要求1-3的任一权利要求的表达基因盒，其特征在于所述蛋白质选自由以下组成的组：

侧链裂解酶（P₄₅₀SCC）;

肾上腺皮质铁氧还蛋白（ADX）;

肾上腺皮质铁氧还蛋白还原酶（ADR）;

3β-羟基类固醇脱氢酶/异构酶（3β-HSD）;

类固醇-17α-羟化酶（P₄₅₀17α）;

NADPH细胞色素P₄₅₀还原酶（RED）;

类固醇-21-羟化酶（P₄₅₀C21）和

类固醇-11β-羟化酶（P₄₅₀11β）。

5、根据权利要求4的表达基因盒，其特征在于所述异源DNA编码序列来源于牛种属。

6、根据权利要求4或5的表达基因盒，其特征在于该异源DNA编码了至少一种权利要求4的组中的蛋白质。

7、根据权利要求4或5的表达基因盒，其特征在于它至少含有另一个异源DNA，该DNA具有它自己的起作用的控制序列，编码了权利要求4组中的一种蛋白质。

8、根据权利要求6或7的表达基因盒，其特征在于该异源DNA编码了牛P₄₅₀SCC和牛的ADX。

9、根据权利要求5中的表达基因盒，其特征在于该异源DNA编码了酶P₄₅₀SCC，并且该表达基因盒取自于用PGBSCC-n表示的组，其中n是1至17的任一整数。

10、根据权利要求5的表达基因盒，其特征在于该异源DNA编码了酶P₄₅₀17α，并且该表达基因盒取自于用PGB17α-n表示的组，其中n是1至5的任一整数。

11、根据权利要求5的表达基因盒，其特征在于该异源DNA编码了酶P₄₅₀21C，并且该表达基因盒取自于用PGBC21-n表示的组，其中n是1至9的任一整数。

12、根据权利要求5的表达基因盒，其特征在于该异源DNA编码了酶P₄₅₀11β，并且该表达基因盒取自于用PGB11β-n表示的组，其中n是1至4的任一整数。

13、一种重组宿主细胞及其子代，包括有微生物、植物或动物的细胞，并含有异源DNA的表达基因盒，其特征在于该表达基因盒为权利要求1至12的任一权利要求中的表达基因盒。

14、根据权利要求13的重组宿主细胞及其子代，其特征在于该宿主是一种微生物。

15、根据权利要求14的重组宿主细胞及其子代，其特征在于该宿主是一种酵母菌（Saccharomyces）、Kluyveromyces或杆菌（Bacillus）或者是大肠杆菌（Escherichia        Coli）。

16、根据权利要求13至15的任一权利要求的重组宿主细胞及其子代，其特征在于它至少含有两个如权利要求1至12的任一权利要求中限定的表达基因盒。