[发明专利]纯化洁霉素的方法

说明书

本发明属于萃取制备优级洁霉素的工艺，即研究一种新的萃取工艺，具有高效提取洁霉素和分离B组分的效果。

萃取法是从发酵液中提取洁霉素的主要方法。国内外普遍采用的是正丁醇萃取工艺。该工艺的缺点是工艺流程冗长，分离B组分效果差。

洁霉素是一种广谱抗生素，临床上用于葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌等敏感菌株及对其它抗生素耐药的金黄色葡萄球菌所致的感染，对败血症、细菌性心内膜炎、肺炎、骨髓炎等有较好的疗效。

洁霉素是一种碱性抗生素，1964年由Hoeksema等测定其结构式如下：

其中：R＝CH₂CH₂CH₃为洁霉素

R＝CH₂CH₃称为B组分，又名U-21699

在发酵生产洁霉素过程中，除洁霉素外还将产生少量B组分，它在洁霉素质量控制中占有重要位置，它的生物活性仅为洁霉素的1/4，因而直接影响洁霉素的药用效果。近几年国内外均用洁霉素做生产氯洁霉素的原料，对B组分控制更加严格，一般要求B组分＜2%。

文献报导通过选择合适的前体，可使B组分在发酵过程中得到控制（U.S.P.3812014，U.S.P.4271266）。国外在这方面做了大量工作，但国内目前的发酵工艺尚不能有效地控制B组分，一般发酵液中B组分含量为6-8%。如其结构所示，B组分仅少一个亚甲基-CH₂，其化学性质与洁霉素极为相近，二者分离是一个辣手的问题。采用传统的丁醇提取工艺无法有效地分离B组分。目前国内厂家生产的洁霉素中B组分含量一般均大于3%。研制新的提炼工艺，有效地降低B组分是医药工业战线上艰巨的任务。

本发明研制出一种新工艺，其特点是将提炼工序分为两个阶段。第一个阶段使用一种具有高萃取能力但选择性较差的萃取体系，首先从发酵液中萃取洁霉素及大部分B组分;然后用盐酸（或H₂SO₄）反萃，制取效价大于2万单位/ml的洁霉素浓缩液。第二阶段使用一种萃取洁霉素能力较弱但选择性好的萃取体系，从浓缩液中选择性萃取洁霉素，在此阶段可使进入洁霉素产品中的B组分＜1.5%。

本发明在第一段萃取中，于初始洁霉素水相效价1500-5000单位/ml，温度25-60℃，初始pH10-12条件下，采用传统工艺使用的正丁醇，或本发明作者在中国专利申请号89107627.1所提出的碳原子数大于5的各种长链醇，或中性磷（膦）类，或配以煤油等稀释剂的中性磷（膦）类萃取剂，萃取洁霉素，用酸反萃，制取洁霉素效价＞2万单位/ml的反萃液;第二段萃取，于初始pH10-12条件下，用中性磷（膦）类萃取剂或配以煤油等稀释剂的中性磷（膦）类萃取剂，萃取洁霉素以分离B组分，用盐酸反萃，制得洁霉素效价在20-30万单位/ml范围、pH2-3的水溶液，加丙酮结晶，制得洁霉素盐酸盐产品。

本发明所用的中性磷（膦），包括磷酸三烷基酯类，如磷酸三乙酯（TEP），磷酸三丁酯（TBP）等;烷基膦酸二烷基酯类，如异烷基膦酸二丁酯（以C₆为主的异烷基膦酸二丁酯的混合物），环烷基膦酸二异戊酯（六元环）等;以及三烷基氧化膦类，如三辛基氧膦（TOPO），三烷基氧膦（以TOPO为主要成分的氧膦混合物）。

其萃取能力按下列次序递增：

磷酸三烷基酯类＜烷基膦酸二烷基酯类＜三烷基氧化膦类

由于发酵液中含有较多蛋白质及其它有机物和无机杂质，这些杂质是造成萃取过程中乳化的主要原因。因此在第一段萃取中，只能在反应罐中间歇作业，所用萃取剂浓度应偏高，可采用配以惰性有机溶剂如煤油等的含磷酸三烷基酯类70-100%，或含烷基膦酸二烷基酯类60-100%，或含三烷基氧化膦类20-70%的萃取剂，或采用100%正丁醇，或100%碳原子数为5以上的长链醇作萃取剂。

第一阶段所制备出的浓缩液中，各种造成乳化的杂质已基本排除。故第二阶段萃取可在连续作业的设备中完成，如混合澄清槽或萃取塔等。此时，所用萃取剂浓度可相应降低。可采用30-100%的磷酸三烷基酯类-煤油或烷基膦酸二烷基酯类-煤油，10-70%的三烷基氧化膦类-煤油萃取。

附图示出不同浓度的TBP和TRPO对从浓缩液中萃取洁霉素的效果。图中萃取条件为：初始pH10-11，洁霉素效价50000单位/ml，相比O/A＝1/1，用TBP时，温度为55℃，用TRPO时，温度为35℃。