[发明专利]制备胰高血糖素的方法

权利要求书

1．一种制各胰高血糖素的方法，其包括：

制备下式所示的融合蛋白

X-Glu-Glucagon               (Ⅰ)

其中X是70-170个氨基酸的先导顺序，Glu是谷氨酸残基，Glucagon代表胰高血糖素的氨基酸顺序，以及

用可特异地水解谷氨酸残基的羧基端肽键的酶处理所说的融合蛋白，以裂解所说的融合蛋白质。

2．根据权利要求1的方法，其中所说的顺序X含有部分干扰素γ、ΔCys-干扰素γ，或干扰素α80A2之氨基末端顺序。

3．根据权利要求1的方法，其中所说的胰高血糖素氨基酸顺序如下式所示：His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr LeuAsp Ser Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Ley Met AsnThr                                (Ⅱ)

4．根据权利要求1的方法，其中所说的融合蛋白是通过培养将表达式Ⅰ所示融合蛋白的表达载体导入大肠杆菌所得到的转化株而制备的。

5．根据权利要求4的方法，其中所述的转化株是保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M90004的大肠杆菌菌株。

6．根据权利要求1的方法，其中所说的胰高血糖素是经下述程序回收的，包括：

(a)用适当的变性剂或表面活性剂溶解所说的融合蛋白，

(b)降低所说变性剂或表面活性剂的浓度，

(c)将酶加入步骤(b)中制得的混合物中，从而得到含有由所说融合蛋白部分分解而产生之可溶性中间产物的反应混合物，

(d)将所说的反应混合物脱盐，以得到含有所说中间产物和所说的酶，但不含有所说变性剂与表面活性剂的部分，

(e)借助所说部分中含有的酶使反应继续进行，以释出胰高血糖素，以及

(f)回收释放的胰高血糖素。

7．根据权利要求1的方法，其中所说的酶是得自金黄色葡萄球菌的蛋白酶V8。

8．根据权利要求1的方法，其中胰高血糖素的纯度经高效能液相色谱仪测定为99％或99％以上。