[发明专利]大肠杆菌疫苗的制备方法

权利要求书

1．保护个体免受大肠杆菌感染的疫苗的制备方法，其特征在于将大肠杆菌的鞭毛与药物上可接受的载体混合。

2．根据权利要求1的疫苗的制备方法，其特征在于使用对vero细胞具有毒害活性的鞭毛。

3．对温血动物中的大肠杆菌感染具有免疫活性的毒素的制备方法，其特征在于培养可表达毒素的细胞，所说的毒素

a)由一条单一多钛链组成；

b)用SDS-PAGE测得的分子量为30-100kD；

c)可见于丝状集合体和/或与之有关；

d)天然状态下不具有结合的糖残基；

e)对vero细胞和对一日龄小鸡具有毒性；

f)在100℃加热1小时仍保持其毒性，此后分离该毒素或其片段。

4．根据权利要求3的毒素的制备方法，其特征在于该毒素可通过下列方法从属于血清型H10的大肠杆菌菌株中得到：

a.在胰蛋白酶大豆肉汤中培养所说的细菌；

b.用截断值为30kD的滤器浓缩所得培养物的不含细胞上清液；

c.用20mmol/升Tris-HCl缓冲液冲洗此滤器上面的物质；

d.将上述洗过的物质在一个Sepharose(R)4B柱子上分离；

e.收集高分子量级分；

f.对上述级分进行SDS-PAGE。

5．根据权利要求3或4的毒素的制备方法，其特征在于细胞表达SDS-PAGE测得的分子量约为47kD，等电点值约为4.8和部分氨基末端的氨基酸序列为Ala-Gln-Val-Ile-Asn-Thr-Asn-Ser-Leu-Leu-(?)-Thr-Gln的毒素。

6．保护个体免受大肠杆菌感染的疫苗的制备方法，其特征在于将根据权利要求3-5制备的毒素与药物上可接受的载体混合。

7．保护个体免受大肠杆菌感染的疫苗的制备方法，其特征在于将能够表达一个编码根据权利要求3-5制备的毒素的DNA序列的转化的微生物与药物上可接受的载体混合。

8．根据权利要求3-5的制备毒素的方法，其特征在于利用如超过滤，离心和／或分子筛色谱法除去上清液中低分子量成分，而纯化出与CH7菌株毒素的抗体具有反应性的大肠杆菌的不含细胞的级分，通过它与所说抗体的反应性选出含有毒素的级分。