[发明专利]四氢叶酸化合物光学纯非对映异构体的制备方法

权利要求书

1.一种制备5，6(R或S)，7，8-四氢叶酸或其钙盐的期望的实质纯(6R或6S)非对映异构体的方法，该方法包括以下步骤：

(a)用来自Clostridium sp ATCC No.7905的四氢叶酸甲酰化酶将四氢叶酸或取代的四氢叶酸或其钙盐的6R和6S非对映异构体混合物的6S型物进行酶促甲酰化，以形成含10-甲酰基-5，6S，7，8—四氢叶酸或其钙盐，未反应的5，6S，7，8-四氢叶酸或其钙盐(若存在的话)，未反应的5，6R，7，8-四氢叶酸或其钙盐的混合物，并

(b)(1)在与5，6R，7，8-四氢叶酸或其钙盐的混合物中分离出10-甲酰基-5，6S，7，8-四氢叶酸或其钙盐，然后环化和水解所述的10-甲酰基-5，6S，7，8-四氢叶酸或其钙盐，使产生5，10-次甲基-5，6S，7，8-四氢叶酸，或5-甲酰基-5，6S，7，8-四氢叶酸或其钙盐，或前面二者均有；或

(2)在存在5，6R，7，8-四氢叶酸或其钙盐时，环化和水解所述10-甲酰基-5，6S，7，8-四氢叶酸或其钙盐，使产生5，10-次甲基-5，6S，7，8-四氢叶酸，或5-甲酰基-5，6S，7，8-四氢叶酸或其钙盐；或前面二者均有，此后进行以下两步之任一步

(i)衍生化5，6R，7，8-四氢叶酸或其钙盐使生成5-取代的-5，6R，7，8-四氢叶酸或其钙盐然后分离这些组分；或用

(ii)从5，6R，7，8—四氢叶酸或其钙盐混合物中分离出所含5，10-次甲基-5，6S，7，8-四氢叶酸和所含5-甲酰基-5，6S，7，8-四氢叶酸或其钙盐。

2.按权利要求1所述的方法，其特征还可包括：化学甲酰化、环化和水解所述未反应的5，6R，7，8-四氢叶酸或其钙盐使产生5-甲酰基-5，6R，7，8-四氢叶酸或其钙盐，或者可用其它功能基团衍生化所述5，6R，7，8-四氢叶酸或其钙盐使生成5-取代的5，6R，7，8-四氢叶酸或其钙盐。

3.按权利要求1所述的方法，其特征还可包括：转化实质纯的5-甲酰基—5，6S，7，8-四氢叶酸或其钙盐或5-甲酰基-5，6R，7，8-四氢叶酸或其钙盐成为相应的酸或盐。

4.一种如权利要求1所限定的方法，其特征在于，未反应的5，6R，7，8-四氢叶酸的化学甲酰化是在羰二亚胺存在下用甲酸进行的。

5.一种如权利要求1所限定的方法，其特征在于，所述酶促甲酰化反应在一种含放射性同位素标记的甲酸或其衍生物的反应混合物中进行。

6.一种用于制备期望的实质纯5-甲酰基-5，6S，7，8-四氢叶酸或其钙盐的方法，其特征在于，该过程包括如下步骤：

(a)用来自Clostridium sp ATCC No.7905的四氢叶酸甲酰化酶将一种5，6，7，8-四氢叶酸或其钙盐的6R和6S非对映异构体混合物的6S型物酶促甲酰化使形成一种混合物，包含10-甲酰基-5，6S，7，8-四氢叶酸或其钙盐；未反应的5，6S，7，8-四氢叶酸或其一种钙盐(如果存在的话)；和未反应的5，6R，7，8-四氢叶酸或其钙盐，和

(b)在存在5，6R，7，8-四氢叶酸或其钙盐时，环化和水解所述的10-甲酰基-5，6S，7，8-四氢叶酸或其钙盐，使形成5，10-次甲基-5，6S，7，8-四氢叶酸，或5-甲酰基-5，6S，7，8-四氢叶酸或它们的钙盐，或前二者都有，此后

(c)在与5，6R，7，8-四氢叶酸或其钙盐的混合物中分离出所含5，10-次甲基-5，6S，7，8-四氢叶酸或其钙盐。

7.按权利要求6所述的方法，其特征还在于：转化实质纯的5-甲酰基-5，6S，7，8-四氢叶酸或其钙盐为相应的酸或盐。