[发明专利]四氢叶酸化合物光学纯非对映异构体的制备方法

说明书

本发明介绍的是制备光学纯四氢叶酸化合物非对映异构体的一种新方法，该方法包括在得自细菌的甲酰四氢叶酸合成酶存在下仅仅将5，6，7，8-四氢叶酸外消旋混合物中的5，6S，7，8-四氢叶酸组分转化成10-甲酰基-5，6S，7，8-四氢叶酸。

甲酰四氢叶酸及其盐已知是有药效的。见Remington’s Pharma-ceutical Services，Mack Publishing Co.，Easton，PA 1985(Remington’s)p.1023。Kerwar et al.，U.S.4，746，662揭示，注射甲酰四氢叶酸或其盐，可增强甲氨喋呤的抗关节炎功效。EPO Patnet Publication No.0，266，042，May 4，1988，介绍了用甲酰四氢叶酸纯异构体制备甲氨喋呤救援剂，与5-氟脲嘧啶合用治疗结肠直肠癌，以及治疗叶酸缺乏。Wisowaty et al.在U.S.4，500，711中描述了甲酰四氢叶酸及其盐的纯化。

甲酰四氢叶酸常规以盐的形式投药，例如碱金属和碱土金属的盐，如甲酰四氢叶酸钙盐，最好是1-异构体。

化合物N—((((2-氨基-5-甲酰基-3，4，5，6，7，8-六氢-4-氧代-6-喋啶基-甲基)氨基)苯甲酰基)-L-谷氨酸，钙盐(1∶1)，五水合物，(甲酰四氢叶酸钙USP)以分子式(Ia和Ib)1∶1混合物的钙盐形式出售，这两个分子式中化合物在C—6位分别具有(R)和(s)立体化学。Ib

它主要用作如甲氨喋啶等叶酸拮抗剂的解毒剂，后者阻断二氢叶酸向四氢叶酸的转化。甲酰四氢叶酸盐用水配制，加适当的防腐剂，作注射用。如Physician’s Desk Reference，43 ed.Medical Economics Company，Oradcll，NJ 1989(PDR 43rd ed.)P.1124中四氢叶酸钙盐注射剂项下所述。

两种异构体的药代动力学行为有以下不同点：(S)-异构体(Ib)选择性地从胃肠道吸收，并比(R)-异构体(Ia)有较短的血浆半衰期。

据报道(C.Temple，Jr.，J.P.Rose，W.R.Laster & J.A.Mont-gomery，Cancer Treatment Reports，65，1117—1119(1981))，天然存在的异构体Ib，即6S非对映异构体，由于其恢复一碳代谢的有效性，在抢救治疗中是重要的。

非天然存在的5，10-甲烯四氢叶酸非对映异构体抑制从L.casei合成胸腺嘧啶核苷酸(R.P.Leary，y.Gaumont，& R.L.Kisliuk，Biochem.and Biophys，Res.Commun.，56，484—488(1974))，同一非对映异构体也抑制来自大肠杆菌(E.coli)的5，10-甲烯四氢叶酸脱氢酶(V.F.Scott & K.O.Donaldson.Biochem.and Biophys.Res.Commun.，14，523—526(1964))，以上报告连同10-甲酰四氢叶酸同一非对映异构体是来自小鸡肝脏的甘氨酰胺核苷酸甲酰基转移酶(GAR)的强力竞争性抑制剂这一观察，表明四氢叶酸一碳衍生物的非天然存在的非对映异构体既抑制嘧啶也抑制嘌呤的生物合成，从而抑制DNA的生物合成。因此，非天然存在的形式不能认为是生物学惰性的。如果这样的抑制出现在哺乳动物系统，那么就存在仅仅对天然形式(6S)的四氢叶酸特别是甲酰四氢叶酸的潜在临床需求。

非对映异构体组分Ia和Ib已经采用分步结晶和色谱法(J.Feeney，B.Birdsall，J.P.Albrand，G.C.K.Roberts，A.S.Bungen，P.A.Charlton & D.W.Young，Biochem.，20，1837(1981)加以分离(D.B.Cosulich，J.M.Smith，Jr.& H.P.Proglist，J.Am.Chem.Soc.，74，4215(1953))。有人报告，经二氢叶酸还原酶催化，立体专一性地还原二氢叶酸以立体特异性地提供6(S)—异构体(L.Rees，E.Valente，C.J.Suckling & H.C.S.Wood，Tetrahedron，42，117(1986))。