[发明专利]截短的可溶性γ-干扰素受体

说明书

本发明涉及截短的可溶性γ-干扰素受体，具体地说，涉及γ-干扰素受体的可溶性细胞外部分。

γ-干扰素（本文中有时称作IFN-γ）是由激活的辅助T细胞产生的一种细胞素，它对许多类型的细胞，如B细胞、巨噬细胞和T细胞，具有直接的效应。它具有多重效应（Trinchieri等，Immunology  Today，6∶131-136，1985），它的最显著的活性之一是它诱导主要组织相容性复合体（MHC）Ⅰ类和Ⅱ类基因的表达（Kelley等，J.Immunol.，132∶240-245，1984;Collins等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，81∶4917-4921，1984;Cooper等，J.Immunol.，141∶1958-1962，1988;Amaldi等，J.Immunol.，142∶999-1004，1989）。MHCⅡ类基因的表达是抗原处理细胞（antigen-presenting  cell）的标志。Ⅱ类抗原的表达见于巨噬细胞和成熟的B细胞和T细胞，已知γ-干扰素可正调控这种表达。此外，已知γ-干扰素在那些并非是主要抗原处理细胞的细胞中，例如上皮细胞、成纤维细胞、星形细胞、内皮细胞及平滑肌细胞中，诱导Ⅱ类抗原编码基因的表达。这些类型的细胞是否确实处理抗原尚未搞清，但已证明这些类型的细胞中Ⅱ类抗原的诱导与自身免疫疾病的发病相关（Massa等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，84∶4219-4213，1987）。由于γ-干扰素是Ⅱ类抗原的主要刺激剂，它可能在疾病的表现中起重要作用。因此，γ-干扰素或其各种效应的抑制剂，例如在受体界面水平上起作用的抑制剂，在自身免疫疾病的治疗中将有巨大的潜在价值和用途。

曾有人尝试给予小鼠γ-干扰素的单克隆抗体以抑制γ-干扰素在小鼠体内的效应（Grau等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，86∶5572-5574，1989）。然而，在给人做这种处理时，必须记住，单克隆抗体本身有可能会诱发中和免疫反应，从而降低这种处理的效果。

现在已经有了表达γ-干扰素受体的重组克隆（参见例外“人γ-干扰素受体的分子克隆和表达”，Aguet，G.等，Cell，55∶273-280，1988），但这些克隆产生的是完整受体，包括胞质（细胞内）区和跨膜区。胞质区可能负责细胞内的信号转换，因此，如果寻找IFN-γ拮抗剂的目的是为了找到血流或其他体液（如关节液）中的IFN-γ并选择性地与之结合，那么胞质区就是多余的。此外，胞质区在正常情况下隐藏在细胞内，因此不能到达免疫系统，所以，全长IFN-γ受体肯定会由于其胞质区而起到抗原的作用，从而被中和掉。如果发生中和，它在引入上述体液中时就会被除去而迅速丧失其效应。因此需要有一种在竞争IFN-γ的同时没有诱发与之相关的副作用的危险的IFN-γ拮抗剂。

IFN-γ受体的编码DNA和所预测的氨基酸顺序已由Aguet等人（同上）公开，他们猜测，先导顺序从氨基酸（残基）1延伸至氨基酸14，跨膜顺序从氨基酸246延伸至氨基酸266（这是其编号）。因此，猜测所预测的IFN-γ受体的细胞外部分是从氨基酸15延伸至氨基酸245;其猜测结构，包括由氨基酸残基1-14组成的先导顺序以及DNA编码顺序，示于附图1A和1B，其中先导顺序的编号为-14至-1，预测的细胞外部分的编号为1-231。

在下面的讨论中，所有编号均按附图1的编号给出，但有可能与本文所提到的出版物中的编号不同。

尚不确定这个顺序中有多少对能与IFN-γ特异结合的有效IFN-γ受体是必需的。但是，已知（Stueber等，文摘A3-15，J.Interferon  Res.，9∶Suppl.2，1989年10月）氨基酸残基1-198不构成有效的受体，但据该文摘报道，氨基酸残基12-231（包括早于12位起始的顺序）构成如大肠杆菌中所产生的有效受体，即在N端或C端有六个组氨酸残基。这些组氨酸残基肯定会改变受体的根本性质，例如其免疫原性，因此在要把可溶性受体作为药物使用时，这些残基是非常不希望有的。我们自己的工作表明，氨基酸残基6-221确实构成有效的受体，但其他顺序也可能是有效的。