[发明专利]稳定的成纤维细胞生长因子组合物

说明书

本发明提供了一种通过将FGF与蔗糖八硫酸（SOS）盐，尤其是与其铝盐硫糖铝（Sucralfate）或钾盐结合或络合使成纤维细胞生长因子（FGF）在热、酸和/或分解蛋白的环境中稳定存在的方法。本发明还涉及含有SOS和FGF的稳定的FGF组合物。该组合物可以用于FGF反应性疾病包括对创伤及胃肠道溃疡的治疗。本发明还涉及SOS在各种诊断方案中的应用及其用作诊断试剂盒中的一种成分。最后，本发明涉及使用SOS纯化FGF。

胃肠道的溃疡性疾病通常指的是消化性溃疡，它是一种胃肠道表皮细胞存在缺损的疾病。这种缺损是盐酸和胃蛋白酶联合作用的结果。从定义上讲，消化性溃疡至少穿透到粘膜下;较浅表的损害称为糜烂。消化性溃疡可发生于胃肠道的多个部位，包括胃、十二指肠或食管，Meckel′s憩室、外科术形成的吻合口处，但罕见于近端空肠。

二十年前，消化性溃疡的治疗包括卧床休息、进清淡饮食、使用抗酸剂和/或对罹患区行手术切除。最近，H₂-受体拮抗剂已用于治疗消化性溃疡，两种最常用的H₂-受体拮抗剂是呋喃硝胺和甲氰咪胍，两者的治疗作用都是抑制胃酸的分泌。对这两种拮抗剂的疗效及付作用已进行了广泛的研究（如Thomas et al.，in Clinics in Gastroenterology，Volume13，Number2，p501-529）。

尽管这两种拮抗剂已广泛用于临床治疗并相当成功，但是许多消化性溃疡对H₂-受体拮抗剂疗法却并无反应。例如，在用甲氰咪胍或呋喃硝胺治疗十二指肠溃疡四至六周后，有20～30%的溃疡没有愈合，其原因尚不清楚。而且，用H₂-受体拮抗剂治疗后，溃疡复发不是罕见的。

硫糖铝已被用作一种具有最小付作用的溃疡治疗剂。据认为，硫糖铝影响胃肠道的保护和修复/愈合多种机理，包括：ⅰ）胃蛋白酶及胆酸的吸附;ⅱ）胃刺激时使胃粘膜产生碳酸氢盐分泌和粘液分泌的细胞保护作用;ⅲ）保护prolifactine区以免遭受损害;ⅳ）保护血管的完整性。尽管在理解硫糖铝如何防止糜烂和溃疡发生方面取得了重大进展，然而，在认识它是如何加速溃疡愈合以及解释该药物慢性治疗作用方面还存在很大的差距。

业已证明成纤维细胞生长因子（FGF）将成为一种有潜力的拮抗因子，尤其是主司创伤愈合过程中的新血管形成。FGF有两种类型，即酸性成纤维细胞生长因子（aFGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）。但是，aFGF和bFGF均具有酸和/或热不稳定性。因此，当在治疗消化性溃疡这样的酸和/或热的环境中应用FGF时，需要它对于该环境稳定的以致最大限度增加它每微升的治疗体积（vo/ul）。

最近，一个PCT申请号为PCT/US8903467（1990.3.8.公开）的申请（其内容被参考结合在本文中）公开了一种抗酸性FGF组合物，它包括重组FGF和下列成分的结合：ⅰ）促稳定剂，如葡萄胺聚糖、硫酸聚糖及硫酸化的环糊精;ⅱ）抗分泌剂，如H₂-受体拮抗剂;ⅲ）细胞保护剂;以及ⅳ）抗酸剂。这些新型组合物据称对于FGF将是一个很有效的药物但又必须经受酸和/或热的环境的疾病极为有效。

然而，还需要寻找一些新的途径来进一步稳定FGF;以使它在治疗胃肠道疾病，创伤等疾患时发挥其诊断和治疗潜力。

本发明提供了一种稳定FGF的方法，它包括将FGF与蔗糖八硫酸盐（SOS），特别是其铝盐（硫糖铝）或钾盐，结合或络合。这里所说的“SOS”包括蔗糖八硫酸盐，它包括但不限制于其铝盐和钾盐，本发明的稳定的FGF组合物可用于治疗哺乳动物实质上患有的任何FGF反应性疾病，尤其是用于治疗那些存在酸性或热环境的疾病或者存在蛋白分解因子的疾病。具体地说，本发明的组合物可通过给病人施用有效量的与SOS结合了的FGF以及药用载体、赋形剂或稀释剂用以治疗胃肠道的溃疡性疾病。该组合物也可以用于存在干扰FGF治疗价值的蛋白分解因子的创伤的治疗。

本发明的另一方面是发现了SOS对FGF具有较高的亲和力。因此，这就使得SOS可用于FGF的纯化，同时它在对于FGF存在与否和/或存在的量的多少是关键的诊断应用中也是有用的。

图1说明高温对于有或没有SOS的情况下bFGF的影响。

图2说明酸对于有或没有SOS的bFGF的影响。

图3说明胃蛋白酶对于有或没有硫糖铝的rhbFGF突变蛋白CS23的影响。