[发明专利]病毒性肝炎的诊断和治疗

说明书

近来发现病毒性肝炎的特征表现为细胞内某一特定分子构型的dsRNA缺乏。这种dsRNA对于“驱动”特定的宿主防御系统是必需的。这种生化缺陷在肝细胞及淋巴系统的某些外周血细胞中被放大。并且这种缺陷与不同病毒（肝炎病毒，反转录病毒和疱疹病毒经常是在同一个体内的同时增殖有关。外源性提供特定构型的dsRNA带来的理想的临床改善可以确诊这种缺陷。本发明涉及到与肝损伤有关的各种类型病毒如甲型、乙型和非甲非乙型肝炎病毒的治疗方法。

慢性乙型肝炎病毒感染（HBV）是一个全球性的健康问题。在世界范围内大约有2亿人可能有HBV慢性感染。这些感染人群对于个体来说意味着有严重患病的危险，并且它还具全球性流行和感染的巨大威胁。在美国所有正常健康献血者有0.1到0.5%是乙型肝炎表面抗原（HBsAG）阳性¹。在一个有高度感染危险性的选择人群中（医疗保健人员，血友病患者，透析病人，和使用注射器的吸毒者），HBsAg阳性的百分比可以高达30%。慢性乙型肝炎病毒（HBr）携带者可以通过输血或性接触进行传播。有些HBV携带者尤为引起注意，尤其是牙科医生，内科医生，或其他医务工作者，已经有报道这些人员在与病人的多次接触中可以进行传播。

乙肝病毒感染，一般是自我限制，可以导致一种慢性感染状态。10%的HBV感染者可以成为慢性病毒感染，包括：（1）慢性迁延性感染和，（2）慢性活动感染。前者（慢性迁延性感染）经常使病人无症状或者有轻微症状但仍在感染。后者（慢性活动性感染）很有可能会引起严重的衰弱以及危及生命的表现如肝硬变，门静脉高压，和死亡。肝细胞癌与慢性HBV感染也有密切的相关性^2-4。慢性HBV感染病人的病状表现各不相同，从没有症状到表现为中等程度的疲劳，不适，肌肉疼痛，关节痛，瘙痒，甚至表现为更为严重的肝功能不良（如出血性疾病，腹水，和脑病）。与慢性HBV有关的生化异常包括血清肝转氨酶的升高，血清白蛋白降低，血清胆红素升高和凝血酶原时间延长（在迁延性后期肝病当中）。肝炎病毒可以通过人体体液、粪便、性接触等传染。

有HBsAg持续性升高病史连同其他的相关血清学标志一起一直作为慢性HBV感染的一种标志。传统的血清学试验是定性的，HBsAg滴度与感染的严重程度无相关性，并且不一定表示有传染性。近些年来，发明了一种用HBsAg-DNA（HBV-DNA）与放射性标记cDNA进行杂化试验的检查方法。直接检查HBV-DNA能增加检查HBV感染的特异性（有时也出现假阳性HBsAg），并且大大增加了检查HBV感染的敏感性。传统的HBV-DNA检查方法是半定量的;将一种来自感染宿主的血清样本与放射性标记探针cDNA进行轨迹印迹杂化反应，可以得到一种放射自显影照片，用光密度计对该照片进行扫描可以计算出样本信号的密度，这一密度与HBV-DNA的近似量相关。另外，Abbott Labs，Chicago，IL.⁵设计了一种运用消化样本的I¹²⁵标记cDNA探针溶液进行杂化检查的试验。这种检查方法利用液相杂化，一步柱色谱分析和通过γ-释放进行HBV-DNA直接定量。据称该检查方法的限度是1.5微微克HBV-DNA/ml血清。

至少有三方面原因可以说明对HBV感染的有效治疗是重要的。

1、患有慢性活动性肝炎的病人肝脏疾病的改善：已经发现通过抗病毒治疗，乙肝病毒颗粒（HBeAg和HBV-DNA）的丧失与肝脏疾病的组织学改善和肝炎血清标志物的水平降低⁶有关。

2、患有慢性迁延性和慢性活动性肝炎的病人传染性的丧失：已经发现血清中DNA聚合酶和HBeAg的丧失的同时病人血清丧失了对易感黑猩猩的传染力。⁷

3、肝细胞癌发生可能性的降低：发明人所进行的实验首次有力地支持这一观点。

在本发明之前，对于慢性HBV感染及其相关疾病没有已知的治疗方法。近期报道指出干扰素对于某些病人的治疗有暂时的效果。而且，75%以上的慢性HBV感染患者对于干扰素不反应，并且干扰素治疗停止以后的持久效果仍然不稳定。其他的治疗方法效果不佳并且常常伴随有不利的毒付作用（即：阿糖腺苷（adenosine  arabinoside）

图1是对通过病毒探针杂交反应得到的鸭血清乙肝病毒（DHBV）DNA的印迹分析;

图2是分别在两个剂量的ganciclovir和一个剂量安慰剂的作用下进行的血清DHBV  DNA印迹杂交反应;