[发明专利]抗α6整合蛋白抗体

说明书

侵入的癌细胞在血管内皮上的粘连，是转移过程中关键性的第一步，也是具有选择性的一步。在过去的几年中，已发现大量的不同粘连分子参与造血细胞的细胞迁移和返巢机理。转化的肿瘤细胞能以某种不受控制的方式明显误用这种机理，从而导致在不同于其原来所在组织的组织中发生转移。

本发明的单克隆抗体具有抑制转移的特异能力，在这一基础上现已意外地发现，另一种称为α6整合蛋白（integrin）的分子（综述见Hemler，Annu.Rev.Immunol.8∶365-400，1990），即这些单克隆抗体所识别的抗原，也可被认为是参与转移过程的内皮粘连分子，而且可能是最重要的内皮粘连分子。

文献中已描述了针对α6整合蛋白链的三种其他抗体，它们的生产方法完全不同。抗体GoH3是通过用血小板免疫大鼠而产生的。选择这种抗体是因为它识别血小板蛋白复合物Ⅰc-Ⅱa，该复合物后来被定义为α6/β1整合蛋白（Sonnenberg等，J.Biol.Chem.262：10376-10383，1987;Hemler等，J.Biol.Chem.263：7660-7665，1988）。抗体135-13C是在大鼠体内针对纯化的肿瘤联结蛋白TSP-180制备的，该抗体现在被称作α6/β4整合蛋白（Kennel等，Cancer  Res.41：3465-3470，1981;Kennel等，J.Biol.Chem.264：15515-15521，1989）。最后，抗体GB36是在小鼠体内针对人胎盘微绒毛制备物而生产的。该抗体识别人癌细胞上的细胞表面蛋白（Hsi等，Placenta  8：209-217，1987）。现已有人提出，所识别的蛋白（α6/β1整合蛋白）可能对维持细胞极性有作用，但尚未进行功能测定。

癌、黑素瘤和内皮细胞能够与细胞外基质分子昆布氨酸粘连。包括α1/β1和α2/β1和α6/β1在内的几种整合蛋白复合物，参与介导这种结合作用。其中的一种整合蛋白即α6/β1，似乎能与昆布氨酸发生单特异性反应，而抗体GoH3则能阻断细胞-昆布氨酸相互作用，该抗体将α6整合蛋白确定为由弹性蛋白酶消化产物得到的E8片段的受体（Sonnenberg等，1990）。抗体135-13C也对细胞与昆布氨酸的结合有影响，但程度较低。

本发明的抗体不干扰细胞与昆布氨酸的结合，但却阻断黑素瘤细胞与血管内皮细胞的细胞间相互作用。这一发现强烈提示，本发明的抗体识别α6整合蛋白链上的一个迄今为止尚属未知的结构域，这个结构域明显不同于GoH3、135-13C或GB36的结合位点。这可由如下事实进一步证实，即，GoH3与绵羊的皮肤返巢淋巴细胞发生交叉反应，而本发明的抗体则不然。

因此，本发明的一个目的是提供一种单克隆抗体或其功能衍生物，尤其是Fab片段，其特征在于它能与哺乳动物（例如小鼠，优选人）的α6整合蛋白结合（抗α6整合蛋白单克隆抗体），该抗体抑制转化细胞的转移，尤其是通过抑制转化细胞与血管内皮的相互作用。一般来说，这类转化细胞一方面是以带有α6整合蛋白作为表面分子为特征的细胞，例如黑素瘤、癌、T细胞淋巴瘤或肉瘤，优选黑素瘤和癌，尤其是黑素瘤;另一方面是带有迄今未确定的α6整合蛋白配体作为表面分子的细胞。

本发明的另一个目的是，提供分泌上述单克隆抗体的杂交瘤细胞系，以及由这些细胞系分泌的单克隆抗体。按本发明所述获得的杂交瘤细胞系“F3C34”已保藏在Deutsche  Sammlung  von  Mikroorganismen  und  Zellkulturen  GmbH（DSM）。本发明的另一个目的是提供上述单克隆抗体或其片段作为治疗剂，尤其是用于通过抑制转移而治疗癌症。

与α6整合蛋白结合的抗体可以用某些短肽作起始抗原来制备，这些短肽的氨基酸顺序是由人α6整合蛋白的已知氨基酸顺序衍生的（Hogervorst等，Eurp.J.Biochem.199：425-433，1991）。这些肽可以用肽和蛋白质化学合成领域内已知的方法来制备，例如用如Gross和Meyenhofer（"The  Peptide"，Vols.1-9，Academic  Press，Inc.，Harcourt  Brace  Jovanovich，Publs.，San  Diego，1979-1987）或Fields和Nobel（Int.J.Pept.Prot.Res.35：161-214，1990）所述的部分或完全液相或固相合成法。