[发明专利]从玉米籽粒制取超氧化物歧化酶的方法

说明书

本发明属于生物化学领域中酶的制取方法，涉及从玉米中制取超氧化物歧化酶的一种方法发明。

近十几年人们先后开发了从动物的血液及组织、微生物、人参、大豆中提取超氧化物歧化酶的工作，並将其应用于医药、食品、化妆品工业。目前应用的超氧化物歧化酶主要是从动物血液及组织中提取的，其造价高，原料不易得，安全性差，从而限制了应用。本发明是以玉米为原料提取，经检索国内、外未见与本发明类似的从玉米籽粒制取超氧化物歧化酶的方法。

本发明从玉米籽粒制取超氧化物歧化酶的方法目的是提供一种从玉米中制取超氧化物歧化酶的工艺方法，该超氧化物歧化酶为医药、保健品、食品、日用化妆品等行业的添加剂，具有医疗、抗癌、抗衰老、防病治病的作用。

本发明从玉米籽粒制取超氧化物歧化酶的方法内容简述：

本发明是一种从玉米籽粒制取超氧化物歧化酶的方法，其特征在于工艺方法为：

1、浸泡玉米：将玉米籽粒洗净后，加入浸泡液，在10～50℃温度下浸泡20～70小时，诱导产生超氧化物歧化酶;

2、粉碎：吸胀后的玉米籽粒加入1.5～3倍的PH＝8～8.50.05～0.1摩尔/升的硫酸铵-氨水缓冲液和硫代硫酸钠、二硫苏糖醇匀奖，然后搅拌，提取0.5～2小时，离心，过滤;

3、上清液超滤浓缩：高速离心除去固形物，然后过滤得到提取液;

4、浓缩液加硫酸铵盐析后，离心，超滤去杂蛋白，脱盐后再浓缩，提取液通过超滤装置浓缩至原来体积的1/4;

5、浓缩液经DE-32，P-30柱层析分离，加入固体硫酸铵至30-60饱合度盐析，使大部分杂质蛋白沉淀，然后离心除去沉淀物得上清液;

6、上清液通过超滤进一步去除杂蛋白，然后反复超滤脱盐，並浓缩后冷冻干燥，得精品超氧化物歧化酶。

浸泡液的配方为：每升水溶液中含有：硝酸铵412.5毫克、硝酸钾475毫克、磷酸钾42.5毫克、7水硫酸亚铁28毫克、4水硫酸锰22.3毫克、7水硫酸锌8.6毫克、5水硫酸铜0.025毫克、萘乙酸10^-3PPM、盐酸硫铵素0.4毫克、盐酸吡多素0.5毫克、烟酸0.5毫克、赤霉素10^-1PPM配制而成。

本发明从玉米籽粒制取超氧化物歧化酶的方法提取的超氧化物歧化酶可广泛应用于医药、保健品、食品和日用化妆品等行业作为添加剂，具有抗癌、抗衰老、美容的作用，可防病治病、延年益寿。从玉米中提取超氧化物歧化酶较之从动物血液及组织中提取具有安全可靠、无病毒交叉感染、原料来源广泛，较人参、大豆提取具有经济合理等特点，剩余废物还可以综合利用作为生产饲料。

实施例：

将1000克玉米籽粒，加1500毫升浸泡液，在25℃温度下浸泡40小时后，去除浸泡液，用清水冲洗吸胀的玉米籽粒三遍，加入2000毫升PH＝8.2，0.05摩尔/升的硫酸铵-氨水缓冲溶液，同时加入硫代硫酸钠5克、二硫苏糖醇1克，粉碎后在室温下搅拌，提取40分钟匀奖液离心后倾出上清液，然后过滤，滤液通过截留分子量为5000的中空纤维超滤装置浓缩至500毫升。在缓慢搅拌下分多次加入固体硫酸铵228克，使非超氧化物歧化酶蛋白沉淀，滤去沉淀，含有超氧化物歧化酶的滤液通过分子截留量为10万的超滤器再去杂蛋白然后用分子截留量为5000的滤膜浓缩至100毫升，然后分别用1000毫升2.5摩尔浓度的，PH＝9.8的磷酸钾缓冲液反复超滤五次脱盐，最后得50毫升浓缩液。浓缩液倾入Whatman  DE-32柱（2×30厘米）以5～300摩尔浓度，PH＝7.8的磷酸钾缓冲液进行洗脱，收集活性部分。收集液上Biogel，P-30柱（1.5×100厘米）用0.1摩尔/升氯化钠的PH＝7.8，2.5摩尔浓度的磷酸钾缓冲液洗脱，收集高活性流出液，经分子截留量5000的超滤器超滤除盐，浓缩后冷冻干燥，得20.6毫克超氧化物歧化酶，总活力3080U/毫克蛋白。

对比实验1

将1000克玉米籽粒以1500毫升水在25℃浸泡40小时，冲洗后吸胀的玉米加入2000毫升的缓冲液、5克硫代硫酸钠、1克二硫苏糖醇，粉碎后搅拌提取40分钟，离心上清液过滤。

实施例的总活力为150000U;

对比实验1的总活力为80000U。

对比实验2

不加硫酸钠的情况下，按实施例所述的实验步骤提取超氧化物歧化酶，与实施例对比，实施例总活力为112500U;

对比实验2的总活力为60000U。