[发明专利]酶法合成胆红素

权利要求书

1、一种以新鲜动物血为原料一步合成胆红素的方法--酶法合成胆红素，其特征在于胆红素的酶促降解合成工艺如下：

(1)在新鲜动物血中加入8%柠檬酸钠抗凝剂，在温度为5～10℃，速率3000r.p.m条件下离心15′，得到的血红蛋白液以10000r.p.m高速捣碎5′，破碎细胞成血红蛋白浆；

(2)在血红蛋白浆中，按新鲜血量的5%加入重组血红素加氧酶系的混合酶液和3倍血红蛋白浆量、PH为7.4的磷酸缓冲液上反应柱，同时在反应柱中加入2%的H₂O₂和5%葡萄糖液，在37℃温度条件下反应5小时；

(3)在经酶解的反应液中加入1N的氢氧化钠溶液，调节PH至11，并煮沸3′；

(4)碱解液在5℃温度条件下，以3000r.p.m速率离心15′去除蛋白；

(5)在上清液中按1∶1的重量比加入氯仿液，再用2N盐酸调溶液至PH至4.5～5.0，分层，收集氯仿混合液；

(6)氯仿混合液经旋转蒸发浓缩后，减压，在50℃温度下回收氯仿得胆红素液；

(7)胆红素液用无水乙醇、乙醚洗涤除去杂质得到的胆红素，再在60℃温度中真空干燥为胆红素成品。

2、按权利要求1所述的酶法合成胆红素，其特征在于重组的血红素加氧酶系混合酶液是从新鲜动物的肝、脾制得的血红素加氧酶、胆绿素还原酶和NAOPH-细胞色素C还原酶以1∶1∶1的比例组合，加入pH7.4的磷酸缓冲液配制成50mM的酶液，并加入5%的肝糜浆即成混合酶液。