[发明专利]感觉神经抗体及其制备方法

说明书

本发明涉及一种发酵或使用酶的方法以合成所要求的化合物或组合物或从外消旋混合物中分离旋光构体，是一种肽或蛋白质及其制备，具体地说是一种单克隆抗体及其制备。

周围神经损伤后，若两断端的感觉束与运动束互相接错，再生的神经轴索就无法到达功能相同的神经终末器，使相应部位的皮肤和肌肉收缩功能都丧失。因此，神经两断端的功能束能否准确对位是神经修复后功能恢复的重要条件之一。在周围神经的外科修复中怎样才能准确、快速、简便地鉴别功能神经束，是骨科与显微外科、神经外科、整形外科以及残疾与康复医疗中极为关注的课题。

从1954年澳大利亚的Sunder Land最早使用形态学法区别神经束性质以来，先后出现了电刺激法(Gruber1976)、碳酸酐酶法(Piley 1984)和乙酰胆碱酯酶(Cruber 1976，钟世镇1987)等方法。但这些方法属非特异性显示法，影响其结果的可靠性，而且反应时间长，因此在监床推广应用中受到很大的限制，多少年来，国内外的学者一直都在孜孜不倦地钻研，力求攻克这一难题。

本发明的目的在于提供一种能特异性地与感觉神经结合，从而能区分感觉、运动神经纤维的感觉神经抗体及其制备方法。

本发明的技术解决方案是：

一种感觉神经抗体，能特异性地与感觉神经相结合。

一种制备感觉神经抗体的方法，包括如下步骤：

(a)取作为抗原的哺乳类感觉神经特异蛋白；

(b)用抗原免疫小鼠，然后提取小鼠细胞；

(c)将经免疫的小鼠的细胞与骨髓瘤细胞融合，并接种、培养克隆；

(d)用细胞免疫化学法检测抗体，筛选出只对感觉神经元起免疫反应的阳性克隆，再经有限稀释法克隆化三次以上，获得分泌感觉神经抗体的杂交瘤细胞株，CCTCCNO：C93004分泌出感觉神经抗体。

取哺乳类感觉神经特异蛋白的步骤是：取哺乳类神经组织，匀浆、离心、提取上清液，再以等电点聚焦SDS凝胶电泳区分出感觉神经特有的蛋白区带，将蛋白回收、纯化。等电聚焦SDS凝胶电泳的PH控制在3-11。

用抗原免疫小鼠的步骤是：向小鼠腹腔内注入与完全福氏佐剂等量混合的感觉神经蛋白100微克，2-4周后，再向小鼠腹腔注入与不完全福氏佐剂等量混合的感觉神经蛋白100微克，再过1-3周后，向小鼠腹腔内再注入感觉神经蛋白100微克，过2-4天后提取小鼠的脾细胞。

将经免疫的小鼠的细胞与骨髓瘤细胞融合，并接种、培养克隆的步骤是：将经免疫的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞，在PEG作用下融合，用含小牛血清的HAT液稀释后接种于铺有饲养细胞的细胞培养板中，置于5％的CO₂孵箱中37℃培养，2-4周后换HAT液继续培养。

本发明所提供的感觉神经抗体能特异地与感觉神经结合，故能在将抗体特异性标记后(如考马斯亮兰标记)方便地区分出感觉与运动神经。本发明所提供的感觉神经抗体的制备方法，简单、可靠，材料易得。

下面结合实施例对本发明作进一步说明：

实施例1：

取人神经组织，匀浆、离心、提取上清液，SDS凝胶电(PH3-11)区分出感觉神经特有的蛋白区带回收与纯化感觉神经特异蛋白，作为抗原。