[发明专利]重组突变出血败血性巴斯德氏菌蛋白及其制备方法

权利要求书

1、一种重组突变蛋白，该蛋白至少部分由一个DNA顺序编码，该DNA顺序可以由toxA基因，包括编码出血败血性巴斯德氏菌出血败血亚种(Pasteurellamultocidasspmultocida)45/78毒素(PMT)的toxA基因，通过一个或更多个密码子的置换、缺失或插入而得到，所述蛋白能够与针对由出血败血性巴斯德氏菌出血败血亚种45/78编码的PMT而产生的抗体结合，其计算分子量至少为140kD。

2、权利要求1的蛋白，该蛋白由一个DNA顺序编码，该DNA顺序可以由编码出血败血性巴斯德氏菌出血败血亚种45/78毒素的toxA基因，通过所述基因中一个独特EcoRI限制位点下游的一个或更多个密码子的置换、缺失或插入而得到。

3、权利要求1的蛋白，该蛋白的分子量至少为141kD。

4、权利要求3的蛋白，该蛋白的分子量至少为143kD。

5、权利要求1的蛋白，该蛋白用某种纯化方法纯化时至少80%可纯化，所述纯化方法包括：利用Q-Sepharose Fast Flow（Pharmacia）在2cm²×25cm色谱柱中进行阴离子交换色谱，以表达所述蛋白的细菌提取液形式加入蛋白，加到柱上的细菌总蛋白量约为200mg，流速约为30cm/小时，用含0-1000mM NaCl缓冲液的线性梯度洗脱吸附的蛋白，必要时接着用Phenyl Sepharose CL-4B（Pharmacia）柱对洗脱出的组分进行疏水性相互作用色谱，该柱的线度为2cm²×20cm，流速为30cm/小时，洗脱吸附的蛋白并测定其含量。

6、权利要求5的蛋白，该蛋白用所述纯化方法至少94%可纯化。

7、权利要求1的蛋白，该蛋白是由一个DNA顺序编码的蛋白，该DNA顺序是由toxA基因通过用编码不同氨基酸的密码子置换至少一个编码113-1285位间氨基酸的密码子而得到的。

8、权利要求7的蛋白，该蛋白是由一个至少有两个密码子（例如至少三个密码子）被置换的DNA顺序编码的。

9、权利要求8的蛋白，该蛋白是由一个至少有四个密码子被置换的DNA顺序编码的。

10、权利要求7的蛋白，编码该蛋白的DNA顺序中，被置换的密码子是编码选自丝氨酸、组氨酸、谷氨酰胺和苏氨酸的氨基酸的密码子。

11、权利要求7的蛋白，编码该蛋白的DNA顺序中，被置换的密码子是1175-1285位之间的密码子。

12、权利要求11的蛋白，编码该蛋白的DNA顺序中，被置换的密码子是1200-1230位之间的密码子。

13、权利要求1的蛋白，编码该蛋白的DNA顺序是由toxA基因通过缺失至少一个编码1131-1285位间氨基酸的密码子而得到的。

14、权利要求13的蛋白，该蛋白是由一个缺失至少两个密码子（例如至少三个密码子）的DNA顺序编码的。

15、权利要求14的蛋白，该蛋白是由一个缺失至少四个密码子的DNA顺序编码的。

16、权利要求15的蛋白，该蛋白是由一个缺失至少七个密码子的DNA顺序编码的。

17、权利要求13的蛋白，编码该蛋白的DNA顺序中，所缺失的密码子是编码选自赖氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸、缬氨酸和天冬氨酸的氨基酸的密码子。

18、权利要求13的蛋白，编码该蛋白的DNA顺序中，所缺失的密码子是1175-1285位之间的密码子。

19、权利要求18的蛋白，编码该蛋白的DNA顺序中，所缺失的密码子是1215-1285位之间的密码子。

20、权利要求1的蛋白，编码该蛋白的DNA顺序是由toxA基因通过在编码1131-1285位间氨基酸的密码子的下游插入至少一个密码子而得到的。