[发明专利]PTP1D：一种新蛋白质酪氨酸磷酸

说明书

本申请是美国申请系列No.07/956，315（1992年10月6日申请，该文献以其全文引入本文作为参考）的部分继续。

本发明，属生物化学和细胞及分子生物学领域，涉及一种新的蛋白质酪氨酸磷酸酶（PTP），称作PTP  1D。包括PTP  1D蛋白质，为其编码的核酸构建体，含有核酸构建体的重组表达载体，含有或表达重组表达载体的细胞，生产和鉴别PTP  1D蛋白质和DNA构建体的方法，PTP  1D蛋白质和糖蛋白特异性的抗体，以及用于筛选能与PTP  1D结合和抑制或刺激PTP  1D蛋白质酪氨酸磷酸酶活性的化合物的方法。

蛋白质磷酸化是一种调节不同细胞过程的基本机制。大多数的蛋白质磷酸化作用发生在丝氨酸和苏氨酸残基，由于发现许多致癌基因产物和生长因子受体具有内蛋白质酪氨酸激酶（PTKase或PTK）活性，在酪氨酸残基的磷酸化作用则引起人们极大的兴趣。现已确认了蛋白质酪氨酸磷酸化作用在生长因子信号转导，细胞循环增进及肿瘤转化方面的重要性（Hunter等人.，Ann.Rev.Biochem.54：987-930（1985）;Ullrich等人，Cell  61：203-212（1990）;Nurse，Nature  344：503-508（1990）;Cantley等人，Cell  64：281-302（1991））。

蛋白质酪氨酸残基的磷酸化作用是磷酸化和去磷酸化反应竞争的动力学过程。这些过程由PTKs（催化酪氨酸磷酸化）和蛋白质酪氨酸磷酸酶（PTPases或PTPs）（该酶特异性地使已磷酸化的蛋白质的酪氨酸残基去磷酸化）的相互作用而调节的。因此，由PTK和PTP酶活性的平衡决定细胞内蛋白质酪氨酸磷酸化的净含量（Hunter，T.，Cell  58：1013-1016（1989））。

PTKs是一个大蛋白质家族，包括许多生长因子受体和与丝氨酸/苏氨酸特异性蛋白质激酶享有共同祖先，但与其不同的潜在致癌基因（Hanks等人，Science  241：42-52（1988））。已将许多PTKs与细胞循环诱导中的起始信号联系起来（Weaver  等人.，Mol.Cell.Biol.11：4415-4422（1991））。

我们目前对PTKs改变基础机制的大部分理解来自有跨膜拓扑结构的受体型PTKs（RPTKs）。认为特异性配体子RPTK细胞外区的结合可诱导低聚合作用，增加酶（激酶）活性及激活信号转导途径（Ullrich等人，同上文）。通过突变或超量表达的激酶活性的失调被认为是细胞转化基础的机制（Hunter等人，1985，同上;Ullrich等人，同上文）。

蛋白质磷酸酶含有至少两个明显不同的族（Hunter，T.1989，同上文）：蛋白质丝氨酸/苏氨酸磷酸酶和蛋白质酪氨酸磷酸酶（PTPs）。PTPs本身是一个族，包括至少两个亚类。第一亚类包括低分子量的，细胞内酶，含一个保守的催化磷酸酶区。该亚类的成员包括：

（1）胎盘PTP  1B（Charbonneau等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA  86：5252-5256（1989）;Chernoff等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.87：2735-2789（1989））;

（2）T细胞PTP（Cool等人;Proc.Natl.Acad.Sci.USA  86：5257-5261（1989））;

（3）大鼠脑PTP（Guan等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA  87：1501-1502（1990））;

（4）神经元磷酸酶（STEP）（Lombroso等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA  88：7242-7246（1991））;和