[发明专利]精制乙型肝炎高度特异转移因子的生产方法

说明书

本发明关于一种用于治疗乙型肝炎病毒感染的精制乙型肝炎高度特异转移因子制造方法。

乙型肝炎病毒（HBV）慢性感染包括慢性乙型HBV携带，这一疾病已经严重地威胁着人类的健康。机体感染了HBV之后，由于种种原因不能有效地清除HBV，呈现对HBV的免疫功能不足，或伴有出现“抗HBs-抗独特型抗体”（抗HBs-抗Id）这种自身免疫反应，造成对HBV的免疫紊乱。机体对HBV的免疫功能障碍，导致成为HBV慢性感染。目前，国内外对HBV均缺乏特效抗病毒药，因而免疫调节治疗就显得非常重要。

发明者曾研制了一种称为乙型肝炎高度特异转移因子（简称HSTF），帮助对HBV免疫功能障碍的机体建立正常的免疫功能，以消灭病人体内的HBV。经初步临床观察，显示HSTF是治疗慢性乙型肝炎难得的一种好药，对重建机体关于HBV的正常免疫状态，可以起着独特的重要作用。

本发明的目的是为了生产纯度的HSTF，名称为乙型肝炎高度特异转移因子精制品或称精制乙型肝炎高度特异转移因子，以扩大HSTF在治疗HBV感染时的临床适应症和提高HSTF的疗效。

本发明基于申请号为92111441.9的“乙型肝炎高度特异转移因子生产方法”内容进行进一步的开发，实验表明，HSTF特异活性组分能与乙型肝炎病素表面抗原即HBSAg或HBs-抗Id特异结合，根据这种特性，本发明的技术方案如下：首先取用血浆呈乙肝病素表面抗体（抗-HBs）阳性者的人体血液，该血液其它指标达到正常卫生标准，分离出白细胞，按常规方法提取转移因子，这种制品简称为HSTF，采用乙肝疫苗也即HBsAg或抗HBs-抗Id与HSTF相结合，再通过磷酸盐缓冲液稀释，通过透析、超滤、分离纯化出HSTF的特异活性组分，再经生理盐水洗涤，浓缩、除菌。得精制的乙型肝炎高度特异转移因子。

本发明制品与HSTF的区别在于：本发明制品不能做为一般转移因子使用，仅含有对HBV特异的免疫活性组分，即仅能用于HBV感染的治疗，初步的临床应用表明，HSTF的疗治其HBsAg阴转率等高于美国某一药厂生产的干扰能（γFN2b）用于治疗慢性乙肝的效果，本发明制品将对帮助HBV慢性感染者建立正常免疫状态起着更有效的作用。

本发明中乙肝疫苗一般首先经生理盐水稀释、透析洗涤；或经洗涤后再与白蛋白混合，例如人血白蛋白、牛血清白蛋白，再置冰浴中缓慢滴加戊二醛，搅拌至胶冻形成，研碎，离心弃上清，得经处理后的乙肝疫苗（吸附剂），再将上述洗涤过的或还经进一步处理过的乙肝疫苗（吸附剂）与HSTF混合。

抗HBs-抗Id的制备可以用常规方法得到以外，本发明还优选如下方法：先由乙肝疫苗免疫一种哺乳动物，使其血浆含高滴度抗-HBs后，取该动物血，提取高效价抗-HBs，以该高效价抗-HBs为抗原免疫另一种哺乳动物，当获高滴度抗HBs-抗Id后，取这种动物血，提取高效价的抗HBs-抗Id，并经DEAE一纤维纯化，最后得抗HBs-抗Id（吸附剂）。

抗HBs-抗Id在HSTF混合以前一般也首先经生理盐水稀释、透析洗涤后再混合，或在洗涤后置冰浴中缓慢滴加戊二醛，撑拌无胶冻形成，研碎、离心弃上清，得处理后的抗HBs-抗Id（吸附剂）再与HSTF混合；在滴加戊二醛以前还可先与白蛋白混合，再滴戊二醛。

上述混合中使用的试剂，可以是磷酸盐一氯化纳缓冲液，也可以是生理盐水等，乙肝疫苗或抗HBs-抗Id与HSTF相混合时，在0～4℃之间搅拌使其吸附，再透析或离心洗涤，至透析液或离心废弃液A280nm＜0.015，取透析余留物或离心沉淀物，再通过磷酸盐缓冲液稀释，搅拌温度是15℃～25℃，再超滤或透析，浓缩，除菌过滤，分装，冻干，即得到本发明精制乙型肝炎高度特异转移因子。

实施例1：

a.缓冲液的配制。配制PH7.0磷酸盐-氯化钠缓冲液（简称PBS）：KH₂PO₄12.25g，NaOH2.05g，NaCl 17.55g，加水至100ml。按比例配制，高压灭菌后贮存，用时稀释一倍。配制PH7.0磷酸盐缓冲液（简称PB）：同PBS配制，仅不含NaCl。

b.洗涤乙肝疫苗：将乙肝疫苗HBsAg，（选用基因工程疫苗为佳），用生理盐水稀释，透析，重复多次，透析袋内置留物即洗涤过的乙肝疫苗。