[发明专利]共生培养法制备双歧杆菌乳酸杆菌乳酸链球菌肠溶固定比微粒的工艺

说明书

本发明涉及一种用共生培养法制备双歧杆菌，乳酸杆菌肠溶固定化微粒的工艺。

双歧杆菌、乳酸杆菌、乳酸链球菌是人类肠道内主要的有益菌群，可以抑制有害菌群的生长繁殖，促进机体新陈代谢，增强机体抵抗能力，调节人体内微生态平衡，已应用于医疗保健药品和食品。但目前双歧杆菌、乳酸杆菌、乳酸链球菌产品几乎均是单独使用，而且这些活菌制剂均不能有效地克服胃酸的杀伤，现有的双歧杆菌的制备工艺无氧条件要求高，培养液体积大，原料消耗大，干燥时耗能大，生产成本高。

本发明的目的在于提供一种可以有效地克服胃酸的杀伤，原料消耗小、无氧条件要求低、能耗小、成本低，且可增强保健功能和治疗效果的一种制备双歧杆菌、乳酸杆菌、乳酸链球菌共生固定化微粒的工艺。

本发明的目的是这样实现的，本工艺的步骤包括：

①用0.5∶0.5-5∶0.5-5的双歧杆菌、乳酸杆菌、乳酸链球菌的二级种子在改良牛奶培养基中，在厌氧罐里，控制温度在35-40℃条件下共生培养40-50小时制成混合菌液。

②用2-10％的可食性肠溶性的包埋剂与1-5％混合菌液混合，用挤压法或离心法或其它方法成型加固定剂固定成固定化微粒。

③将固定化微粒在改良牛奶培养基中，在厌氧罐里，控制温度在35-40℃，进行增殖培养40-50小时，使微粒中活菌数增长上千倍。

④微粒经过滤在30-40℃进行真空低温干燥，制成干燥微粒。微粒活菌含量在50亿个以上/克。

这里所述双歧杆菌的二级种子是指双歧杆菌属(Bifido-bacterium)的婴儿双歧杆菌(Binfantis)、青春双歧杆菌(Badolescentis)、长双歧杆菌(B.longum)、双歧双歧杆菌(B.bifidum)的一种或一种以上双歧杆菌组合培养的种子液。

所述乳酸杆菌二级种子是指乳酸杆菌属的保加利亚乳酸杆菌(L.buigaricns)，嗜热乳杆菌(L.thermophilus)，嗜酸乳杆菌(L.acicdophilum)的一种或一种以上组合培养的种子液。

所述乳酸链球菌是指产生消化链球菌(P.prodnctus)，四联消化链球菌(P.tetradius)，汉孙链球菌(S.hansenii)，短小链球菌(S.parvulus)，中间型链球菌(S.intermedius)等的一个种或一种以上组合培养的种子液。

所述改良牛奶基包含(重量百分比)：脱脂牛奶20-30％，酵母浸膏0.01-0.05％，天冬氨酸0.02-0.05％，半胱氨酸0.01-0.03％，低聚糖1-3％。

所述可食性肠溶性包埋剂包括海藻酸钠、酪蛋白钠、淀粉、乙二醇酸钠、蜂蜡、明胶、硅油等。

所述固定剂包括氧化钙、甲醛等。

经以上工艺制备的双歧杆菌与乳酸菌共生固定化微粒在胃里不溶解，可有效地克服胃酸对活菌的杀灭作用，而在肠道内能半小时左右崩解，释放出活菌，又采用了双歧杆菌与乳酸菌复方，故增强了保健功能和治疗效果。    

本工艺采用三菌的混合培养，由于乳酸菌是兼性厌氧菌，能有效地消耗培养液中小量氧，造成有利于双歧杆菌生长繁殖的厌氧条件，促进双歧杆菌的生长繁殖，从而较双歧杆菌单独培养时无氧条件要求低，原材料消耗小、降低了成本。固定成型后的湿微粒进行增殖培养，对菌数增殖有利，再过滤低温干燥，大大降低了干燥时的能耗。

实施例：按以下步骤进行

1、用双歧杆菌属中青春双歧杆菌、婴儿双歧杆菌菌种，分别在三角瓶中，10％脱脂牛奶，用含蛋白胨1.0，蛋白胨1.0，酵母浸膏0.5，磷酸二氢钾0.25，可溶性溶粉0.25，大豆蛋白胨0.3，牛肉膏粉0.22、氯化钠0.3，肝浸膏粉0.12的培养基在38℃下培养48小时，得到双歧杆菌二级种子。

2、乳酸菌属中嗜酸乳杆菌菌种和上述链球菌中之任一链球菌菌种分别在三角瓶中用牛奶培养基在38℃，培养48小时得二级种子。

3、将乳酸菌、双歧杆菌二级种子按1∶1混合在改良牛奶培养基中(脱脂牛奶20％，酵母浸膏0.03％，调节PH6.5-7.0，添加天冬氨酸0.04％，半胱氨酸0.01％，低聚糖1％)接种5％，在厌氧罐中经38℃培养48小时，得混合菌液。

4、用2％海藻酸钠溶液作包埋剂，加3-5％混合菌液，用挤压法造粒在2％CaCl溶液中固定成微粒。

5、在厌氧罐中，用改良牛奶培养基在38℃下，再将固定化微粒增殖培养48小时，使活菌数增加至千倍以上。

6、将增殖后微粒滤去液体部分，在30-40℃低温真空干燥成微粒。成品固定化微粒活菌含量在50亿个以上/克。