[发明专利]维生素D3类似物,其制备方法,药物组合物及用途

说明书

本发明涉及化合物1，25-二羟基-16-烯-24-氧代-胆钙化甾醇(维生素D₃)及1，24，25-三羟基-16-烯-胆钙化甾醇。它们可用下述结构表示：其中W是O或是(H，OH)。

它们可用作治疗肿瘤疾病，治疗过度增生性皮肤病及治疗皮脂腺疾病的药剂。

本发明还涉及含有效量的式I化合物及药学上可接受的载体的药用组合物，以及式I化合物在制备刺激HL-60细胞的分化作用或减少人体角质化细胞增生的药物方面的用途。

式I化合物(下文也称为1，25(OH)₂-16-烯-24-氧代-D₃及1，24，25-(OH)₃-16-烯-D₃)是1，25-二羟基-16-烯-胆钙化甾醇(下文称为1，25(OH)₂-16-烯-D₃)的代谢产物。它们可以通过将1，25-(OH)₂-16-烯-D₃灌注到鼠的肾内，提取灌注液，分离出式I化合物来制备。我们惊异地发现，1，25-(OH)₂-16-烯-24-氧代-D₃和1，24，25-(OH)₃-16-烯-D₃能抵抗来自其它羟化酶的进一步水解作用。

式I化合物能刺激HL-60细胞的分化作用，因而能使该化合物用作治疗肿瘤疾病例如白血症的药剂。它们还能减少人体角质化细胞的增生，因而使该化合物能用作治疗过度增生性皮肤病例如牛皮癣，基础细胞癌，角质化症及角化病的药物。

对于治疗过度增生性皮肤病，例如牛皮癣，基础细胞癌，角质化疾病及角化病，式I化合物能以表皮给药的方式用于需要这种治疗的病人，例如剂量范围为每克皮肤表面配剂1-1000μg。式I化合物也能以口服给药的方式治疗肿瘤疾病如白血症，以及治疗过度增生性皮肤病如牛皮癣，基础细胞癌，角质化症及角化病，例如其剂量范围为每天0.1-10μg。

1，25-(OH)₂-24-氧代-16-烯-D₃能诱发人体前髓细胞的分化作用，因而使该化合物可用于治疗肿瘤疾病，该化合物的活性可通过下述本技术领域公知的试验方法说明：

1，25-(OH)₂-24-氧代-16-烯-D₃在HL-60细胞形态学分化作用方面的效果。

a)方法：所采用的组织培养基是补充了谷氨酰胺，抗生素和20％牛胎儿血清的RPMI-1640(Gibco)。

将1，25(OH)₂-16-烯-D₃和1，25-(OH)₂-24-氧代-16-烯-D₃溶于足量的乙醇中，得到1mM的储备液。当处理该化合物时应避光并储存于暗处的-20℃氩气氛中。储备液在上述组织培养基中被稀释至下表1所指出的浓度。将储备液放入烧瓶中，补加足量乙醇，使最终浓度为0.1％。

HL-60肿瘤细胞株最初从前髓细胞白血症病人体内得到，并可从American Type Culture Collection(ATCC^#CCL240)得到。将该细胞在组织培养基中一周两次连续传代保存在液体培养物中。对每个试验点，使细胞在复制烧瓶中生长，将该细胞以每瓶10⁶个细胞的比率接种并于上述化合物存在下生长共4天。作为载体的乙醇在每个试验的所有稀释度下应保持恒量，以便不影响在所用浓度下(＞0.1％)该细胞的分化作用。于37℃温育4天后，评价培养物的细胞分化作用。

通过氮兰四唑(NBT)还原的生物化学方法来定量被分化的细胞，将1ml细胞悬浮液从每个烧瓶中取出，离心10分钟，再悬浮于约200μl工作溶液中，该工作溶液每ml NBT含100ng十四烷酰佛波醇乙酸乙酯并存放于放在冰上的有盖的管形瓶内。NBT在计数当天被制成新鲜的在生长基中的浓度为1mg/ml。该细胞在37℃水浴中温育30分钟，取一部分放入血球计，测定每约200个细胞中的兰—黑细胞总数，然后计算被分化细胞的百分比。b)结果：其结果，其中包括诱发50％细胞分化的化合物浓度(ED₅₀)列于表1：