[发明专利]结合稳定的多肽组合物、其治疗、诊断制剂及其制备和使用方法

说明书

本发明涉及结合稳定的多肽和蛋白质组合物及制剂，还涉及其制备和使用方法。

多肽和蛋白质用于某些疾病的全身治疗现已在医疗实践中被为广为接受。多肽在替代治疗中所起的作用如此重要，以致很多研究活动投入在用重组DNA技术大量合成。这些多肽中很多是内源性分子，它们在产生生理作用上是很强的，并且是特异性的。

限制这些物质在所期望的应用上的有用性的主要因素是当非胃肠道给药时它们易被血浆蛋白酶代谢。这些物质的口服给药途径更成问题，因为在它们到达所期望的靶组织前除了在胃中的蛋白分解外，胃的高酸度也会将其破坏。由胃和胰酶作用产生的多肽和蛋白质片断被肠的刷状缘膜上的外源性和内源性肽酶裂解，得到二肽和三肽，即使避免了胰酶的蛋白分解，多肽也受到刷状缘肽酶的降解。通过胃后保存下来的任何一点服用的肽在具有渗透屏障阻止其进入细胞的肠粘膜被进一步代谢。

尽管有这些障碍，文献中有实质性证据提示营养性和药用蛋白通过肠粘膜被吸收。另一方面，营养性和药物(多)肽类被肠粘膜细胞上的特异转运系统吸收。这些发现表明，配制恰当的(多)肽类和蛋白质可经口给予，保持对预期用途足够的生物活性。然而，如果可以修饰这些肽类，以便完全或至少程度显著地保持它们的生理活性，同时稳定它们，不受蛋白分解酶的作用，并增强它们通过肠粘膜的渗透能力，那么就能恰当地利用它们达到预期的目的。这样得到的产物将会提供如下优点：产生更有效的吸收，相应地可用较低剂量产生最适治疗效果。

蛋白质的口服或非胃肠道给予所伴随的问题在制药工业上是熟知的，正采用各种策略力图解决它们。这些策略包括合用渗透增强剂，如水杨酸盐(酯)、脂一胆汁酸混合微胶粒、缩水甘油和酰基肉碱，但它们常被发现了引起严重的局部毒性问题，如局部刺激和毒性、上皮细胞层完全磨损和组织炎症。这些问题的引起是因为增强剂通常与肽制品同时给予，常出现从剂型中漏出。改善口服给药的其他策略包括将肽与蛋白酶抑制剂如抑肽酶、大豆胰蛋白酶抑制剂和抑氨肽酶A混合以图限制所给的治疗剂的降解。不幸的是，这些蛋白酶抑制剂是非选择性的，内源性蛋白质也受到抑制。此效应是不合需要的。

通过改变候选药物的理化性质增加肽类通过粘膜的渗透作用也已进行试验。结果表明，单纯提高亲脂性不足以增加跨细胞转运。实际上已有人提出，肽-水氢键断裂是达到肽的经膜扩散上所要克服的主要能障(Conradi，R.A.，Hilgers，A.R.，Ho，N.F.H.，and Bur-ton，P.S.，“The influence of peptide structure on transport acrossCaco-2 cells”，Pharm.Res.，8，1453-1460，(1991))。一些作者描述了蛋白质稳定的问题。

Abuchowski和Davis(“Soluble polymers-Enzyme adducts”，In：Enzymes as Drugs，Eds.Holcenberg and Roberts，J.Wiley andSons，New York，NY，(1981))揭示了各种酶衍生法，以提供水溶性、非免疫原性、在体内稳定的产物。

目前已发表关于蛋白质稳定的大量工作。Abuchowski和Davis公开了酶与聚合物结合的各种方法(同上)，更具体地，这些聚合物为葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、糖肽、聚乙二醇和多氨基酸类。据报告，所得的结合多肽保持其非胃肠道应用所需的生物活性和在水中的溶解性。同样的作者在美国专利No.4,179,337中揭示聚乙二醇在与蛋白质偶联后赋予这些蛋白质溶解性和非免疫原性。但是，这些聚合物不含有适于肠粘膜结合的片断，也不含有能促进或增加膜渗透的任何成分。尽管这些结合为水溶性，它们不被计划用于口服。

Meisner等在美国专利No.4,585,754中指出可通过与硫酸软骨素结合使蛋白质稳定化。这种结合的产物通常是多阴离子的，亲水性很强，缺乏细胞渗透能力。它们通常不被计划用于口服。

Mill等在美国专利4,003,792中指出某些酸性多糖(如果胶、algesic acid、透明质酸和角叉菜胶)可被偶联到蛋白质上，产生可溶性和不溶性产物。这些多糖是来自食用植物的多阴离子的物质。它们缺乏细胞渗透能力，通常不被考虑用于口服。