[发明专利]免疫测定法

说明书

本发明涉及免疫测定。

从存在于不同生物，尤其是细菌、病毒、寄生物及其它致病(感染性)生物的体内得到的体液样品和固体样品如细胞或组织物的检验是按常规进行的。检验在两个主要的范围里进行。一种是对体液样品和固体样品的检验，其目的是诊断疾病，监控疾病过程和/或监控对个体的治疗过程。这种检验通常被称作临床检验，一个典型的临床实验室对大量不同的生物进行检验。“病原体”这个词用在这里表示致病生物。

另一种主要的检验是为了筛选捐献的血液以保持血液的供给及血液制品不受致病的污染。每一个国家的常规管理机关都明确规定需要进行检验的病原体。目前在大多数国家都必须对人类免疫缺陷病毒(HIV)、丙型肝炎(非甲非乙型肝炎)、乙型肝炎及梅毒进行集体检诊。在有些国家还要求检查人T细胞白血病-淋巴瘤病毒(HTLV)。最近大多数国家还必须对HIV-1和HIV-2进行检查。用于输血给即将或已经接受移植的病人或者遭受免疫损伤的病人的血液一般要被检验巨细胞病毒(CMV)的存在。正因为发现新的病原体以及已知病原体的新的亚种对血液的供应造成了威胁，使得对捐献血液检验的强制需要延及这些病原体。

应用最广的血液筛分试验是免疫测定。对于大多数血液病毒病原体来说，检验血液中抗原的存在比检验抗体的存在更难获得所需的灵敏度。一般来说，对HIV、HTLV、丙型肝炎病毒(HCV)和CMV的检验是抗体检验。对乙型肝炎有两种检验：对乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的抗原测定及对乙型肝炎核心抗原(HBc)的抗体测定。目前，大多数国家中都必须检测HBsAg，在某些国家，对乙型肝炎核心抗体的检验也是必需的，还可能被更多的国家采用。抗体和抗原的检验都能用于梅毒。

血液的筛分大规模地进行，尤其重要的是能很快取得结果，因为血液的货架寿命相对较短。为了节约时间和财力，提出了可以在一个检验样品中测出一种以上病原体的测定法。

确定同种病原体的两个亚型的抗体测定法，尤其是用于HIV-1和HIV-2(HIV-1+2)以及HTLV-I和HTLV-II(HTLV-I+II)，已经被供应出售。然而必须指出同种的亚型之间经常有很大的交叉反应性，例如，HIV-1和HIV-2之间的免疫交叉反应性的程度如此之大以致于最初市售的HIV-1检验实际上测出了很大部分含HIV-2的血液。因此，正如在欧洲专利申请EP-A-0484787中所解释的那样，对同种病毒的两种亚型提供的抗体检验法与对基本上没有免疫交叉反应性的两种完全不同的病原体所提供的抗体检测法在技术上有很大的区别。“联合检测法”一词在此是指在对样品的一次检测中，可以检出或测定两种或更多种基本上没有免疫交叉反应性的致病生物。“不同病原体”一词在此表示基本上没有免疫交叉反应性的病原体。

欧洲专利申请EP-A-0484787中提出对捐献血液中可能出现的病毒病原体(血液病毒病原体)进行的联合抗体检测法，尤其是对HIV和HCV(丙型肝炎病毒)的联合检测法。所得到的异相检测法涉及利用多肽包覆于一固体表面以捕获相关的抗体。结果产生的抗原-抗体复合物就可以被测出。

最近市售的这种联合检测法以及HIV-1+2和HTLV-I+II的联合血液检测法的主要缺点是需要在固体表面协同包覆大量抗原。抗原(肽和/或蛋白质)不仅必须均匀包覆，还必须以可使抗原决定簇能与抗体结合的方式包覆。另外，不同抗原之间不得有相互影响。为了确保抗原以令人满意的方式包覆所必须进行的质量控制试验，增加了试验本身以及排斥反应的花费。所要包覆的抗原越多，问题越麻烦花费也越大。每多检测出一种病原体就需要至少增加一种固定抗原的存在。对某些病原体来说，必需能检测出多种抗体。例如，对于HCV，目前可买到的检测包括四种不同抗原。对于HIV-1+2/HCV联合检测则至少需要六种抗原。

除了协同包覆的实际操作上的困难外，得到所需的特异性也有困难。欧洲专利申请EP-A-0484787中指出需要具有强烈抗原性的高纯度抗原。

已经提出用于HIV和乙型肝炎表面抗原的抗体/抗原联合检测法。例如欧洲专利申请EP-A-0286264中提到将能与HIV抗体结合的肽包覆于一固相之上，以及将对HBsAg特异的抗体包覆于一固相之上。这两种固相可以不同，或者也可以将肽和抗体包覆于同一固相上。WO91/10747提到对欧洲专利申请EP-A-0286264中所描述的那种检测法的改进。改进涉及用于包覆和检测HIV抗体的肽的性质以及检测系统的性质。