[发明专利]嗜热链球菌细菌素

说明书

本发明涉及两种嗜热链球菌(Streptococcus(S．)thermophilus)细菌素、能产生这些细菌素的嗜热链球菌菌株、该菌株产生这些细菌素的方法以及这些细菌素和／或该菌株在食品或化妆品生产中的应用。

技术背景

细菌素是一种具有抗菌活性的抗细菌物质或药剂，它含有与抗菌作用或抗生作用有关的蛋白部分。一种细菌素的抗菌谱或抑菌谱一般很窄，通常局限于与产生该细菌素的细菌很近的种属。

目前已知有四种嗜热链球菌细菌素。

尤其是第一种，其分子量为10至20KD，90℃时对热不稳定，对胃蛋白酶敏感(Smaczny et al．，Deutsche Molkerei-Zeitung，105：15，460-464 1984)。

在EP 443543中主要介绍了第二种的抑菌谱，它的特点是能够抑制葡萄球菌属和假单胞菌属细菌的生长．但不能抑制乳酸球菌和肠球菌属以及仙人山杆菌属细菌的生长。

Pulusani等人(J．of Food Science，44：2，575-578，1979)介绍了第三种，它能强烈抑制假单胞菌，对胃蛋白酶不敏感，并含有糖残基。

最后，Gilano等人(Microbiologie-Aliment-Nutrition8，21-30，1990)介绍的第四对胃蛋白酶不敏感，含有糖残基，不能通过有100KD孔的膜。

目前嗜热链球菌在食品方面十分重要，特别与乳产品生产有关，例如酸乳酪和某些乳酪。此外，同时具有抗杆菌属、梭状芽孢杆菌属和李斯特杆菌属活性的细菌素几乎没有。因此，该细菌素可能更为有用，尤其是在这类产品的生产中，换句话说，即需要由这一种属的代表株所产生的多种细菌素，以便具有更广的抗菌谱。

本发明的目的就是要满足这种需求。

发明概述

本发明的主要内容之一就是对两种新的嗜热链球菌细菌素的氨基酸顺序和促使细菌素分泌的信号肽进行特性分析。

编码这两种细菌素的核苷酸序列也是本发明的另一个主要内容。

能产生至少一种本发明所述细菌素的嗜热链球菌菌株也是本发明的另一个主要内容，特别是下述的嗜热链球菌CNCM I-1351菌株，它能产生本发明所述的两种细菌素。

含有至少一种本发明所述的细菌素提取液的生产方法也是本发明的另一个主要内容。

本发明的最后一个主要内容是本发明所述细菌素的应用及其核酸序列和信号序列的应用。

发明详细描述

从捷克斯洛伐克发酵乳产品中分离出嗜热链球菌CNCM I-1351菌株，并且出乎意料地观察到该菌株具有明显抑制多种细菌生长的特性。根据布达佩斯条约，该菌株于1993年8月5日保存在CollectionNationale de Cultures de Microorganismes，PASTEURINSTITUTE，25，Rue du Docteur Roux，F-75724 PARISCEDEX 15，France，编号为No．I-1351。

下面列出了该菌株的详细情况，特别是有关形态学、糖发酵及类似特性：

形态学：

-无鞭毛链状排列球菌，无芽孢形成。

-革兰氏阳性菌，过氧化氢酶阴性，兼性厌氧菌。

糖发酵：

可分解D-葡萄糖、乳糖、蔗糖、棉子糖产生乳酸。不能分解甘露糖、果糖、半乳糖而产生乳酸。

其它：

该菌株可产生至少两种细菌素、一种对细菌素免疫有关的蛋白和具有结构特性的表面多糖。

CNCM I-1351菌株培养物上清液因而具有较宽的抗菌谱。在对该上清液敏感的细菌中，可以包括下列细菌：例如嗜热链球菌、乳酸乳球菌、乳酸乳球菌二乙酰乳酸变种、乳酪乳酸球菌、粪肠球菌、屎肠球菌、发酵乳杆菌、瑞士乳杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、短乳杆菌、乳酪明串球菌、肠膜明串球菌、短双歧杆菌、长双歧杆菌、两歧双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、丙酸杆菌属、无毒李斯特杆菌、单核细胞增多性李斯特杆菌、易变微球菌和肉毒梭状芽孢杆菌、干酪酪酸梭状芽孢杆菌、双酶梭状芽孢杆菌、产芽孢梭状芽孢杆菌、枯草杆菌、短小杆菌及蜡样杆菌的芽孢和营养细胞(Bactéries Lactiques，Vol1，1994，Lorica edition)。

然后可以从CNCM I-1351菌株中分离出两种称为细菌素的与抗菌活性有关的蛋白因子。