[发明专利]促进革兰氏阳性细菌中产生商业重要的外蛋白的方法和系统

权利要求书

1.一种提高革兰氏阳性细菌分泌外蛋白的表达系统，它含有一种革兰氏阳性细菌，这种细菌能够表达高于野生型含量的PrsA蛋白或其功能性同源物，并且能够表达高于野生型含量的至少一种有意义外蛋白。

2. 按照权利要求1的表达系统，其中所述的有意义外蛋白是蛋白酶，脂肪酶，角质酶(cutinase)，淀粉酶，半乳糖酶，支链淀粉酶，纤维素酶，葡糖异构酶，蛋白质二硫化物异构酶，CGT酶(环糊精葡糖酸转移酶)，植酸酶，葡糖氧化酶，葡糖基转移酶，漆酶，胆红素氧化酶，木聚糖酶，抗原性微生物或原生质蛋白，细菌蛋白毒素，微生物表面蛋白，病毒蛋白，一种药物。

3.一种革兰氏阳性细菌，它能够表达高于野生型产量的至少一种有意义外蛋白，并且还含有pKTH277。

4.一种革兰氏阳性细菌，它能够表达高于野生型含量的至少一种有意义外蛋白，并且还至少含有下列之一：至少两个拷贝的枯草杆菌prsA基因或其一种功能性同源物；与导致超量表达该prsA基因或其功能性同源物的强调节序列人工相连的枯草杆菌的prsA基因或其一种功能性同源物。

5.一种识别编码枯草杆菌PrsA的一种功能性同源物的基因的方法，它包括用Southem印迹法识别与枯草杆菌prsA基因的DNA探针杂交的DNA，并证实该基因能编码这样一种蛋白，即当超量表达这种蛋白时，它能够提高一种革兰氏阳性细菌分泌一种有意义外蛋白的分泌能力。

6.一种革兰氏阳性细菌，它表达高于野生型含量的PrsA蛋白或PrsA蛋白功能性同源物，其中该细菌过量产生至少一种有意义外蛋白。

7.一种革兰氏阳性细菌，它含有至少两个拷贝的来自枯草杆菌的prsA基因或至少两个拷贝的PrsA蛋白功能性同源物的基因，其中该细菌过量产生至少一种有意义外蛋白。

8.权利要求6或7的细菌，它含有pKTH277。

9.权利要求6-8中任一权项的细菌，它是杆菌属的，优选选自下列杆菌菌种：嗜碱性芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短杆菌、环状芽孢杆菌、凝固芽孢杆菌、B.lautus、B.lentus、地衣型芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草杆菌和苏云金芽孢杆菌。

10.权利要求6-9中任一权项的细菌，其中所述有意义外蛋白是同源或异源的。

11.权利要求6-10中任一权项的细菌，其中所述外蛋白是蛋白酶，脂肪酶，角质酶(cutinase)，淀粉酶，半乳糖酶，支链淀粉酶，纤维素酶，葡糖异构酶，蛋白质二硫化物异构酶，CGT酶(环糊精葡糖酸转移酶)，植酸酶，葡糖氧化酶，葡糖基转移酶，漆酶，胆红素氧化酶，木聚糖酶，抗原性微生物或原生质蛋白，细菌蛋白毒素，微生物表面蛋白，病毒蛋白，一种药物。

12.一种制备有意义外蛋白的方法，该方法包括在表达高于野生型含量的PrsA蛋白或PrsA蛋白功能性同源物的革兰氏阳性细菌中过量产生所述外蛋白。

13.一种在革兰氏阳性细菌中提高有意义外蛋白分泌的方法，其中细菌过量产生外蛋白，所述方法包括在所述革兰氏阳性细菌中表达高于野生型含量的PrsA蛋白或PrsA蛋白功能性同源物。

14.权利要求12或13的方法，其中细菌是杆菌属的，优选选自下列杆菌菌种：嗜碱性芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短杆菌、环状芽孢杆菌、凝固芽孢杆菌、B.lautus、B.lentus、地衣型芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草杆菌和苏云金芽孢杆菌。

15.权利要求12-14中任一权项的方法，其中有意义外蛋白是蛋白酶，脂肪酶，角质酶(cutinase)，淀粉酶，半乳糖酶，支链淀粉酶，纤维素酶，葡糖异构酶，蛋白质二硫化物异构酶，CGT酶(环糊精葡糖酸转移酶)，植酸酶，葡糖氧化酶，葡糖基转移酶，漆酶，胆红素氧化酶，木聚糖酶，抗原性微生物或原生质蛋白，细菌蛋白毒素，微生物表面蛋白，病毒蛋白，一种药物。

16.PrsA蛋白或PrsA蛋白功能性同源物在革兰氏阳性细菌中提高外蛋白分泌的用途，其中外蛋白在细菌中过量产生，PrsA蛋白或PrsA蛋白功能性同源物以高于野生型含量表达。