[发明专利]哺乳动物细胞系和获得糖蛋白的方法无效
| 申请号： | 94192251.0 | 申请日： | 1994-04-26 |
| 公开（公告）号： | CN1124502A | 公开（公告）日： | 1996-06-12 |
| 发明（设计）人： | H·沃尔夫;K·查尔芬伯格;R·瓦格纳 | 申请（专利权）人： | H·沃尔夫 |
| 主分类号： | C12N15/38 | 分类号： | C12N15/38;C12N15/85;C12N5/00;C12N5/10;C12P21/02 |
| 代理公司： | 中国国际贸易促进委员会专利商标事务所 | 代理人： | 张闽 |
| 地址： | 联邦德国*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 哺乳动物 细胞系 获得 糖蛋白 方法 | ||
1.在无蛋白培养基中稳定地表达作为Epstein—Barr病素抗原的糖蛋白(gp)250(220)、糖蛋白(gp)350和/或杂交糖蛋白(gp)250(220)/(gp)350的哺乳动物细胞系，它是通过下述步骤得到的
(A)从没有选择标记的仓鼠细胞系开始，该选择标记后来被按照(A)(c)所述方法进行染色体整合的载体表达，或被按照(B)所述方法进行染色体整合的载体表达，
(a)在含血清培养基中培养细胞，并使它们附着在底物上或相互附着，
(b)重复更换部分被消耗的培养基，同时缓慢降低培养基的血清含量，最后对其进行无血清培养
—不主动地消除细胞的附着，
—可选地，使细胞球形体形成或分开，分离分开的细胞球形体，在悬浮液中培养同时摇动，选择出在小团粒中生长的或单个生长的细胞
(c)最后，使选择出的细胞经过如下处理步骤，
(ca)用表达上述糖蛋白(gp)的载体转染细胞系，其中，载体含有一种细胞系所没有的选择标记，
(cb)培养细胞系，利用选择标记选择出一旦不再使用选择因予(抑制剂)就能稳定地表达糖蛋白的细胞，或者
(B)使哺乳动物细胞系首先经过处理步骤(A)(ca)和(A)(cb)，再经过处理步骤(A)(a)至(A)(b)。
2.如权利要求1所述的哺乳动物细胞系，其特征在于，将一种仓鼠细胞系，特别是中国仓鼠卵巢细胞系(CHO)如CHO K1＝ATCC CCL61或小仓鼠肾脏细胞系(BHK)如BHK 21 C13＝ATCC CCL10作为该哺乳动物细胞系。
3.如前述任何权利要求所述的仓鼠细胞系，其特征在于，将二氢叶酸还原酶基因(DHFR基因)用作选择标记，将氨甲蝶呤(MTX)用作抑制剂。
4.仓鼠细胞系CHO K1 pMDIHGPTR—PFC6＝DSM ACC2121。
5.生产糖蛋白(gp)250(220)，糖蛋白(gp)350和/或杂交蛋白质(gp)250(220)/(gp)350的方法，特征是
(a)按权利要求1至4任何权项所述方法培养细胞系，使其表达所需糖蛋白并将糖蛋白分泌到培养基中，
(b)从培养基中分离出糖蛋白。
6.生产糖蛋白(gp)250(220)，糖蛋白(gp)350和/或杂交蛋白质(gp)250(220)/(gp)350的方法，特征是
(a)按权利要求1至4任何权项所述方法培养细胞系，使其表达所需糖蛋白并将糖蛋白分泌到培养基中。
(b)从培养基中分离出细胞，特别是利用微量过滤，
(c)用交叉流超滤法进行浓缩和纯化，
(d)然后，借助阴离子交换柱纯化，
(e)超滤和
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