[发明专利]生产酶的方法

权利要求书

1.一种通过发酵表达酶原形式酶的细胞生产活性胰蛋白酶样尖镰孢蛋白酶的方法，其中表达酶原的细胞已用含有编码该酶原的核酸片段转化，该方法包括

a.在锌基金属蛋白酶存在下进行发酵，其中所述的金属蛋白酶由存在于表达酶原的细胞中的重组DNA序列编码和表达，及

b.从发酵培养基中回收活性酶。

2.根据权利要求1的方法，其中编码胰蛋白酶样尖镰孢蛋白酶的核酸序列是从保藏在德国Deutsche Sammlung von Mikroorganismen，Gottingen，保藏号为DSM 2672的尖镰孢菌株获得的。

3.根据权利要求1的方法，其中酶原以酶原前体的形式表达。

4.根据权利要求1的方法，其中金属蛋白酶是从保藏在Deutsche Sammlung von Mikroorganismen，Gottingen，保藏号为DSM 2672的尖镰孢菌株或米曲霉IFO 4177的菌株获得的。

5.根据权利要求1的方法，其中表达酶原的细胞是微生物。

6.根据权利要求1的方法，其中表达金属蛋白酶的细胞是微生物。

7.根据权利要求6的方法，其中微生物是细菌或真菌。

8.根据权利要求6的方法，其中微生物是革兰氏阳性菌，例如芽孢杆菌属或链霉菌属的微生物；革兰氏阴性菌，例如埃希氏菌属的微生物；酵母，例如酵母属的微生物或丝状真菌，例如曲霉属或镰孢属的微生物。

9.一种含有异源核酸片段的丝状真菌宿主细胞，所说的异源核酸片段含有编码酶原形式的胰蛋白酶样尖镰孢蛋白酶和锌基金属蛋白酶的核酸序列，其中至少一个核酸序列是重组核酸序列。

10.权利要求9的丝状真菌宿主细胞，其中所说的宿主细胞是曲霉或镰孢细胞。

11.一种DNA构建体，该构建体含有编码镰孢胰蛋白酶样蛋白酶的DNA序列和编码锌基金属蛋白酶的DNA序列。

12.一种含有如权利要求11限定的DNA构建体的重组表达载体。

13.一种用权利要求1-8任一项的方法生产的活性酶。