[发明专利]1-脱氨基-8-D-精氨酸抗利尿激素的制造方法

说明书

本发明涉及一种制造治疗尿频的高纯1-脱氨基-8-D-精氨酸抗利尿激素的新方法。该方法包括将MPa(R¹)-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys(R²)-Pro-OH(SEQ ID NO：1)与(R³)-D-Arg(HCl)-Gly-NH₂缩合和氧化所产生的肽。

激素类似物1-脱氨基-8-D-精氨酸抗利尿激素(1-β-巯基丙酸-8-D-精氨酸)-抗利尿激素或去氨加压素以下简称为“DDAVP”为治疗诸如尿崩症，夜遗尿和尿失禁引起的尿频的重要抗利尿药。

在本申请中1-脱氨基-8-D-精氨酸抗利尿激素(仍然被称为九肽衍生物)与天然的垂体神经部抗利尿激素不同，它是用1-β-巯基丙酸代替末端的甲硫氨酸并用D-精氨酸代替精氨酸而得到的。同样，合成的起始原料和中间体称为n肽衍生物，其中n为在相应的肽中的氨基酸和假氨酸残基的总数。

佐拉(Zaoral)等的美国专利3,497,491描述了合成DDAVP的均相法，库切克V和佐拉M在1979，Coll.Czechoslov.Chem Com-mun.44：1173-1178中描述了固相法。然而，用现在已知的工艺方法仅得到无定形的1-脱氨基-8-D-精氨酸抗利尿激素，因而难以纯化。作为治疗应用，诸如具升压活性的杂质会导致并发症。

在已知技术中收率可能是以牺牲纯度来提高的，反之亦然，且产品分子越大，纯化就越困难成本也越高。医药领域要求高纯的优质品，因此目前一般强调纯度。然而，目前已知的方法要求过多的纯化步骤，不可避免地会使收率减少。提纯需化人工，并使产品收率明显减少，因而提高了成本。

因此，生产DDAVP的合成路线需要有一种工艺使其中合成的最后步骤的收率得到提高。这将减少对中间体和产品的高成本的提纯的要求和提供高收率的优质产品。同时需要有一种DDAVP经改进的相对不复杂的生产方法，其中，较少生成具升压或其它不需要的生理作用的杂质，或更易在提纯步骤中除去。

本发明的目的是提供一种高产率地生产高纯度的1-脱氨基-8-D-精氨酸抗利尿激素的新方法。

另一个目的是提供一种简单、经济的方法，通过在最终步骤中避免复杂、昂贵的提纯过程而高产率地生产高纯度的DDAVP。

本发明的一种合成1-脱氨基-8-D-精氨酸抗利尿激素(I)的方法，其特征在于包括下列步骤：

(a)制备七肽：

MPa(R¹)-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys(R²)-Pro-OH(II)(SEQ IDNO：1)，或中R¹和R²为巯基保护基，可以相同或者不同；

(b)将步骤(a)的七肽与二肽(R³)-D-Arg(HCl)-Gly-NH₂(III)缩合，式中R³为对酸敏感的氨基保护基；

(c)形成九肽；

MPa(R¹)-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys(R²)-Pro-D-Ary(HCl)-Gly-NH₂(IV)(SEQ ID NO：1)以及

(d)将步骤(c)的九肽在质子性溶剂中用碘氧化。

在步骤(a)中制备七肽的较佳方法为通过三肽MPa(R¹)-Tyr-Phe-X(V)(式中X为在Phe的羧基中取代羟基(-OH)的反应性基团)与四肽(R³)-Gln-Asn-Cys(R²)-Pro-OH(VI)缩合。

巯基保护基R¹和R²可以相同或彼此独立，可为乙酰胺基甲基(Acm)，叔丁基，叔丁基亚磺酸基，对甲基苄基，对甲氧基苄基，2-(3-硝基吡啶亚磺酰基)，乙基氨基甲酰基，三苯基甲基或9-芴基甲基。

本发明的较佳的一个具体实施方案中，巯基保护基R¹的R²两者为乙酰胺基甲基。在本发明的另一较佳的具体实施方案中，氨基保护基R³为N-叔丁氧基(BOC)。

更佳的反应基X为活化的羧酸酯，诸如，对硝基苯酚或羟基琥珀酰亚胺的酯，或者是非活化的羧酸酯，诸如，甲酯、乙酯或苄酯，或者是叠氮化物，于是，反应基X可以是烷氧基，芳氧基或叠氮基，而较佳的烷氧基为琥珀酰亚胺氧基，较佳的芳氧基为对硝基苯氧基。